ISOSPIN Plant RNA

植物組織からのRNA抽出キット

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
ISOSPIN Plant RNA	310-08171	50回用	32,500円
Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA	315-08501	50回用	12,000円	専用オプション製品

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

ISOSPIN Plant RNA

ISOSPIN Plant RNA（アイソスピンプラント RNA）は、植物組織からRNA を抽出・精製するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でRNA がシリカへ吸着する原理を応用しており、フェノールやクロロホルムを使用しません。使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカメンブレンは、充分なRNA 吸着容量と高い溶出効率を確保しています。

本キットでは、夾雑物を遠心分離により除去する方法とシリカメンブレン上でのDNase I 処理を採用しており、約1 時間で高純度のRNA を抽出・精製できます。

Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA

本品は、植物組織からのRNA抽出キット「ISOSPIN Plant RNA」専用のオプションバッファー（補助試薬）です。キットのみでは抽出困難な植物試料からでもISOSPIN Plant RNA のPT-Extraction Buffer に本品を加えるだけで、高収量、高純度なRNAを抽出することができるようになります。

特長

高純度RNA

遠心分離による夾雑物の除去とシリカメンブレン上でのDNase I 処理により高純度なRNA抽出が可能です。

フィルターによる前処理が不要

試料のホモジナイズやろ過を目的としたフィルター処理を必要としません。本キットは遠心分離により夾雑物を沈殿して除去します。

フェノール、クロロホルムが不要

フェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒は使用しません。

DNase I 添付

DNase I （RNase free）がキットに含まれているため、別途購入の必要はありません。

抽出困難な植物試料（松葉やバラ）にはAssist Buffer添加

いままで困難だったマツ（葉）、バラ（葉、花弁）、ツバキ（葉）、ブドウ（果肉、外皮）などからも効率よくRNA抽出可能です。

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製品内容

ISOSPIN Plant RNA (50回用)
構成品	容量	保存	備考
PT Extraction Buffer (植物用)	30 ml x 1本	室温
PT Binding Buffer (植物用)	40 ml x 1本	室温	エタノール含有
PT Wash1 Buffer	40 ml x 1本	室温	エタノール含有（洗浄液）
PT Wash2 Buffer	40 ml x 1本	室温	エタノール含有（洗浄液）
DNase I (RNase free)	2,000 units x 1本	-20°C
10 x DNase I Buffer	1 ml x 1本	-20°C
ddWater (RNase free)	1 ml x 8本	室温	DNase I 溶液調製用・溶出用
Spin Column	50 本 x 1袋	室温	上部パーツ：カラム、下部パーツ：Collection Tube

ISOSPIN Plant RNA の輸送方法

ニッポンジーンから直送する場合、室温品を入れたキット箱と－20°C品とドライアイスを入れたスチロールボックスを一つの段ボール箱にまとめて入れて常温で輸送しています。

Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA （50 回用）
構成品	容量	保存	備考
Assist Buffer 1	3 ml x 1	室温
Assist Buffer 2	2 ml x 1	室温	Assist Buffer 2 中に白色固形物が生じる場合がありますが、品質、性能に問題はありません。このような場合には、容器ごと37°C程度でインキュベートし、白色固形物を完全に溶解させてからご使用ください。

Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA の使用上の注意

別途、ISOSPIN Plant RNA が必要です。抽出液は用事調製してください。また Assist Buffer 1 と Assist Buffer 2 を混合した状態で保存できません。

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使用例

protocol

Data.1　RNA収量の目安

本品で得られるRNAの収量の目安は次の通りである。

試料
ホウレンソウ（葉）	0.5 μg RNA/mg tissue
ブロッコリー（芽生え）	1.0 μg RNA/mg tissue
キャベツ（種子）	1.3 μg RNA/mg tissue
キャベツ（芽生え）	1.4 μg RNA/mg tissue
キャベツ（葉）	0.1 μg RNA/mg tissue
タケ（葉）	0.3 μg RNA/mg tissue
チューリップ（球根）	0.2 μg RNA/mg tissue

Data.2　キャベツ（アブラナ科）種子および葉からのRNA抽出

ISOSPIN Plant RNAと他社製品を用いて、プロトコールに従ってキャベツの種子（約4 mg）および葉（約30 mg）からRNAを抽出した。抽出したRNAは、吸光スペクトル測定およびゲル電気泳動により比較した。さらに、抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写を行い、得られたcDNAをGeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROXを用いてリアルタイムqPCRを行った。

実験条件

サンプル量
・種子（約4 mg）
・葉（約30 mg）
変性ゲル電気泳動
・ゲル　：1% Agarose S（ホルムアルデヒド変性）
・RNA添加量　：種子（1μg）／葉（0.5μg）
・RNA Ladder　：RNA添加量と同量
リアルタイムqPCR
・試薬　：GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
・装置　：ABI 7500 Fast
・鋳型cDNA　：抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写
・増幅鎖長　：441 bp
・テスト数　： n=3

結果

吸光度スペクトル測定結果より、ISOSPIN Plant RNAはA社より低いA230の値を示し、多糖類などの夾雑物が効率良く除去できていることが分かった（図1）。

キャベツ種子	キャベツ葉

図1 吸光スペクトル測定

		【RNA添加量】種子（1μg）／葉（0.5μg）【Marker】 RNA Ladder(RNA添加量と同量) 1% Agarose S（ホルムアルデヒド変性）
図2 変性ゲル電気泳動

キャベツ種子	キャベツ葉
		【試薬】 GeneAce SYBR^® qPCR Mix α Low ROX 【鋳型】抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写【装置】ABI 7500 Fast 【増幅鎖長】441 bp 【テスト数】n=3 赤色：　ISOSPIN Plant RNA 緑色：　A社製品
図3 リアルタイムqPCR

Data.3　タケ（イネ科）カルスからのRNA抽出

タケカルス
（ハチク培養細胞Pn(rpc00047)株から形成）

ISOSPIN Plant RNAと他社製品を用いて、プロトコールに従って各量のタケカルスからRNAを抽出した。抽出したRNAは、吸光スペクトル測定およびゲル電気泳動により比較した。さらに、抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写を行い、得られたcDNAをGeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROXを用いてリアルタイムqPCRを行った。

※本実験で使用した竹のカルスは、富山県立大学荻田信二郎博士（現、公立大学法人県立広島大学）よりご提供頂きました。尚、使用したタケカルスは理化学研究所バイオソースセンターへ委託されたハチク培養細胞Pn（rpc00047）株から形成されたものです。

実験条件

サンプル量
①約65 mg
②約50 mg
③約40 mg
アガロースゲル電気泳動
・ゲル　：0.8% Agarose S／TAE
・RNA添加量　：最終溶出量の1/10（5 μl）
・Marker　：OneSTEP Marker6（5 μl）
リアルタイムqPCR
・試薬　：GeneAce SYBR^® qPCR Mix α Low ROX
・装置　：ABI 7500 Fast
・鋳型cDNA　：抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写
・増幅鎖長　：197 bp
・テスト数　： n=3

結果

吸光度スペクトル測定結果では、ISOSPIN Plant RNAはA社より低いA230の値を示すことから、多糖類などの夾雑物が効率良く除去できていることが分かった（図1）。また、アガロースゲル電気泳動で比較した結果からも、ISOSPIN Plant RNAは効率よくRNAを抽出できていることが確認できた（図2）。

		【ゲル】0.8% Agarose S／TAE 【RNA添加量】最終溶出量の1/10（5 μl）【Marker】OneSTEP Marker6（5 μl）
図1 吸光スペクトル測定	図2 アガロースゲル電気泳動

	【試薬】GeneAce SYBR^® qPCR Mix α Low ROX 【装置】ABI 7500 Fast 【鋳型cDNA】抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写【増幅鎖長】197 bp 【テスト数】n=3
図3 リアルタイムqPCR

Data.4　チューリップ（ユリ科）球根からのRNA抽出

image_B
抽出液の粘性の様子
左：ISOSPIN Plant RNA
右：B社製品

ISOSPIN Plant RNAとB社製品を用いて、プロトコールに従ってチューリップ球根（100 mg）からRNAを抽出した。抽出したRNAは、吸光スペクトル測定およびゲル電気泳動により比較した。さらに、抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写を行い、得られたcDNAをGeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROXを用いてリアルタイムqPCRを行った。

チューリップ球根サンプルは粘性が高く、抽出が難しいとされている。右写真は、チューリップの球根を液体窒素ですり潰して粉末状にした後、1.5 mlチューブに量り取り、各社の抽出Buffer中でペッスルにてすり潰した後の様子である。チューブを逆さにして溶液の粘性を比較した。

実験条件

サンプル量
100 mg
アガロースゲル電気泳動
・RNA添加量　：最終溶出量の1/10（5 μl）

結果

ISOSPIN Plant RNAは粘性の高いチューリップ球根からもRNAを抽出できた。

	最終溶出量の1/10（5 μl）
図1 吸光スペクトル測定	図2 アガロースゲル電気泳動

Data.5　Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA を使用して、杉の葉からのRNA抽出

杉の葉は、粉砕すると粘性物を大量に放出するため、溶液の粘性が高くなりRNA抽出が困難となる。Assist Buffer を組み合わせたISOSPIN Plant RNA オプションプロトコールで、杉の葉 30 mgからRNAを抽出できるか検討した。

実験条件

①　ISOSPIN Plant RNAキット単独の標準プロトコール（製品マニュアル p.3～5参照）
②　本キットとAssist Buffer for ISOSPIN Plant RNA を組み合わせた通常のオプションプロトコール（製品マニュアル p.6~9）
③　TEによる前処理工程後^*1、②の通常オプションプロトコール（製品マニュアルp.6のステップ②注釈、参照）　
　　*1　前処理工程：TE(pH8.0)中でペッスルで軽くすり潰し、遠心分離（13,000 x g、4℃、10分）を行う。
④　TEによる前処理工程後^*1、②のオプションプロトコール、洗浄工程を改変^*2（製品マニュアルp.7のステップ⑲、参照）　
　　*2　PT Wash2 Buffer で 600 μl x 1回洗浄するところ、300 μl x 2回に変更。