ISOSPIN Plant RNA

植物組織からのRNA抽出キット
品名 Code No. 包装単位 価格 備考
ISOSPIN Plant RNA 310-08171 50回用 32,500円  
Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA 315-08501 50回用 12,000円 専用オプション製品

製造元 (株)ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

製品説明

ISOSPIN Plant RNA

ISOSPIN Plant RNA(アイソスピン プラント RNA)は、植物組織からRNA を抽出・精製するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でRNA がシリカへ吸着する原理を応用しており、フェノールやクロロホルムを使用しません。使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカゲル膜は、充分なRNA 吸着容量と高い溶出効率を確保しています。

本キットでは、夾雑物を遠心分離により除去する方法とシリカゲル膜上でのDNase I 処理を採用しており、約1 時間で高純度のRNA を抽出・精製できます。

Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA

本品は、植物組織からのRNA抽出キット「ISOSPIN Plant RNA」専用のオプションバッファー(補助試薬)です。キットのみでは抽出困難な植物試料からでもISOSPIN Plant RNA のPT-Extraction Buffer に本品を加えるだけで、高収量、高純度なRNAを抽出することができるようになります。

特長

高純度RNA

遠心分離による夾雑物の除去とシリカメンブレン上でのDNase I 処理により高純度なRNA抽出が可能です。

フィルターによる前処理が不要

試料のホモジナイズやろ過を目的としたフィルター処理を必要としません。本キットは遠心分離により夾雑物を沈殿して除去します。

フェノール、クロロホルムが不要

フェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒は使用しません。

DNase I 添付

DNase I (RNase free)がキットに含まれているため、別途購入の必要はありません。

抽出困難な植物試料(松葉やバラ)にはAssist Buffer添加

いままで困難だったマツ(葉)、バラ(葉、花弁)、ツバキ(葉)、ブドウ(果肉、外皮)などからも効率よくRNA抽出可能です。

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製品内容

ISOSPIN Plant RNA (50回用)
構成品 容量 保存 備考
PT Extraction Buffer (植物用) 30 ml x 1本 室温  
PT Binding Buffer (植物用) 40 ml x 1本 室温 エタノール含有
PT Wash1 Buffer 40 ml x 1本 室温 エタノール含有(洗浄液)
PT Wash2 Buffer 40 ml x 1本 室温 エタノール含有(洗浄液)
DNase I (RNase free) 2,000 units x 1本 -20°C  
10 x DNase I Buffer 1 ml x 1本 -20°C  
ddWater (RNase free) 1 ml x 8本 室温 DNase I 溶液調製用・溶出用
Spin Column 50 本 x 1袋 室温 上部パーツ:カラム、下部パーツ:Collection Tube

ISOSPIN Plant RNA の輸送方法

ニッポンジーンから直送する場合、室温品を入れたキット箱と-20°C品とドライアイスを入れたスチロールボックスを一つの段ボール箱にまとめて入れて常温で輸送しています。

Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA (50 回用)
構成品 容量 保存 備考
Assist Buffer 1 3 ml x 1 室温  
Assist Buffer 2 2 ml x 1 室温 Assist Buffer 2 中に白色固形物が生じる場合がありますが、品質、性能に問題はありません。このような場合には、容器ごと37°C程度でインキュベートし、白色固形物を完全に溶解させてからご使用ください。

Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA の使用上の注意

別途、ISOSPIN Plant RNA が必要です。抽出液は用事調製してください。また Assist Buffer 1 と Assist Buffer 2 を混合した状態で保存できません。

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使用例

protocol

Data.1 RNA収量の目安

本品で得られるRNAの収量の目安は次の通りである。

試料
ホウレンソウ(葉)
0.5 μg RNA/mg tissue
ブロッコリー(芽生え)
1.0 μg RNA/mg tissue
キャベツ(種子)
1.3 μg RNA/mg tissue
キャベツ(芽生え)
1.4 μg RNA/mg tissue
キャベツ(葉)
0.1 μg RNA/mg tissue
タケ(葉)
0.3 μg RNA/mg tissue
チューリップ(球根)
0.2 μg RNA/mg tissue

 

Data.2 キャベツ(アブラナ科)種子および葉からのRNA抽出

ISOSPIN Plant RNAと他社製品を用いて、プロトコールに従ってキャベツの種子(約4 mg)および葉(約30 mg)からRNAを抽出した。抽出したRNAは、吸光スペクトル測定およびゲル電気泳動により比較した。さらに、抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写を行い、得られたcDNAをGeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROXを用いてリアルタイムqPCRを行った。

実験条件

  1. サンプル量
    ・種子(約4 mg)
    ・葉(約30 mg)
  2. 変性ゲル電気泳動
    ・ゲル :1% Agarose S(ホルムアルデヒド変性)
    ・RNA添加量 :種子(1μg)/葉(0.5μg)
    ・RNA Ladder :RNA添加量と同量
  3. リアルタイムqPCR
    ・試薬 :GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX
    ・装置 :ABI 7500 Fast
    ・鋳型cDNA :抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写
    ・増幅鎖長 :441 bp
    ・テスト数 : n=3

結果

吸光度スペクトル測定結果より、ISOSPIN Plant RNAはA社より低いA230の値を示し、多糖類などの夾雑物が効率良く除去できていることが分かった(図1)。

キャベツ種子
キャベツ葉
 
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data1_ha

図1 吸光スペクトル測定
 
 
data2_tane
data2_ha
【RNA添加量】
種子(1μg)/葉(0.5μg)
【Marker】
RNA Ladder(RNA添加量と同量)
1% Agarose S(ホルムアルデヒド変性)
図2 変性ゲル電気泳動
 
     
キャベツ種子
キャベツ葉
 
data3_tane data3_ha 【試薬】
GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
【鋳型】
抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写
【装置】ABI 7500 Fast
【増幅鎖長】441 bp
【テスト数】n=3

赤色: ISOSPIN Plant RNA
緑色: A社製品
図3 リアルタイムqPCR
 

 

Data.3 タケ(イネ科)カルスからのRNA抽出


タケカルス
(ハチク培養細胞Pn(rpc00047)株から形成)

ISOSPIN Plant RNAと他社製品を用いて、プロトコールに従って各量のタケカルスからRNAを抽出した。抽出したRNAは、吸光スペクトル測定およびゲル電気泳動により比較した。さらに、抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写を行い、得られたcDNAをGeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROXを用いてリアルタイムqPCRを行った。

※本実験で使用した竹のカルスは、富山県立大学 荻田信二郎博士(現、公立大学法人県立広島大学)よりご提供頂きました。尚、使用したタケカルスは理化学研究所バイオソースセンターへ委託されたハチク培養細胞Pn(rpc00047)株から形成されたものです。

実験条件

  1. サンプル量
    ①約65 mg
    ②約50 mg
    ③約40 mg
  2. アガロースゲル電気泳動
    ・ゲル :0.8% Agarose S/TAE
    ・RNA添加量 :最終溶出量の1/10(5 μl)
    ・Marker :OneSTEP Marker6(5 μl)
  3. リアルタイムqPCR
    ・試薬 :GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
    ・装置 :ABI 7500 Fast
    ・鋳型cDNA :抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写
    ・増幅鎖長 :197 bp
    ・テスト数 : n=3

結果

吸光度スペクトル測定結果では、ISOSPIN Plant RNAはA社より低いA230の値を示すことから、多糖類などの夾雑物が効率良く除去できていることが分かった(図1)。また、アガロースゲル電気泳動で比較した結果からも、ISOSPIN Plant RNAは効率よくRNAを抽出できていることが確認できた(図2)。

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【ゲル】0.8% Agarose S/TAE
【RNA添加量】最終溶出量の1/10(5 μl)
【Marker】OneSTEP Marker6(5 μl)
図1 吸光スペクトル測定
図2 アガロースゲル電気泳動
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【試薬】GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
【装置】ABI 7500 Fast
【鋳型cDNA】抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写
【増幅鎖長】197 bp
【テスト数】n=3
図3 リアルタイムqPCR
   

 

Data.4 チューリップ(ユリ科)球根からのRNA抽出

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抽出液の粘性の様子
左:ISOSPIN Plant RNA
右:B社製品

ISOSPIN Plant RNAとB社製品を用いて、プロトコールに従ってチューリップ球根(100 mg)からRNAを抽出した。抽出したRNAは、吸光スペクトル測定およびゲル電気泳動により比較した。さらに、抽出したTotal RNAを鋳型に逆転写を行い、得られたcDNAをGeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROXを用いてリアルタイムqPCRを行った。

チューリップ球根サンプルは粘性が高く、抽出が難しいとされている。右写真は、チューリップの球根を液体窒素ですり潰して粉末状にした後、1.5 mlチューブに量り取り、各社の抽出Buffer中でペッスルにてすり潰した後の様子である。チューブを逆さにして溶液の粘性を比較した。

実験条件

  1. サンプル量
    100 mg
  2. アガロースゲル電気泳動
    ・RNA添加量 :最終溶出量の1/10(5 μl)

結果

ISOSPIN Plant RNAは粘性の高いチューリップ球根からもRNAを抽出できた。

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data2_hana
最終溶出量の1/10(5 μl)
図1 吸光スペクトル測定
図2 アガロースゲル電気泳動

 

Data.5 Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA を使用して、杉の葉からのRNA抽出

杉の葉は、粉砕すると粘性物を大量に放出するため、溶液の粘性が高くなりRNA抽出が困難となる。Assist Buffer を組み合わせたISOSPIN Plant RNA オプションプロトコールで、杉の葉 30 mgからRNAを抽出できるか検討した。

実験条件

① ISOSPIN Plant RNAキット単独の標準プロトコール(製品マニュアル p.3~5参照)
② 本キットとAssist Buffer for ISOSPIN Plant RNA を組み合わせた通常のオプションプロトコール(製品マニュアル p.6~9)
③ TEによる前処理工程後*1、②の通常オプションプロトコール(製品マニュアルp.6のステップ②注釈、参照) 
  *1 前処理工程:TE(pH8.0)中でペッスルで軽くすり潰し、遠心分離(13,000 x g、4℃、10分)を行う。
④ TEによる前処理工程後*1、②のオプションプロトコール、洗浄工程を改変*2(製品マニュアルp.7のステップ⑲、参照) 
  *2 PT Wash2 Buffer で 600 μl x 1回洗浄するところ、300 μl x 2回に変更。

結果

スギの葉は、キットのみでは抽出困難だったが、Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA を組み合わせたオプションプロトコールを行うことでRNA抽出可能だった。また、TEによる前処理工程や、改変して洗浄工程を加えることでより高純度なRNAを抽出できた。

Data.6 「ISOSPIN Plant RNA」と「Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA」の併用によりRNA抽出効率の改善

RNA抽出が困難な植物組織から、「ISOSPIN Plant RNA」のみ、または「ISOSPIN Plant RNA」と「Assist Buffer forISOSPIN Plant RNA」を併用してRNA抽出を行い、抽出したRNA溶液の吸光スペクトルを比較した。

結果

「ISOSPIN Plant RNA」だけではRNA抽出が困難な植物組織において、「Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA」と併用することにより、RNAの収量や純度を改善することができた。

効果が確認された植物組織

「ISOSPIN Plant RNA」と「Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA」の併用によりRNA抽出効率の改善が確認された組織。

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製品マニュアル

SDS(Safety Data Sheet)

リーフレット

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株式会社ニッポンジーン 学術営業課

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