ISOSPIN Plant DNA

植物の葉からのDNA抽出キット

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
ISOSPIN Plant DNA	312-08631	50回用	24,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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使用例
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製品説明

製品外観

ISOSPIN Plant DNA（アイソスピンプラント DNA）は、スピンカラムを用いて植物の葉からDNA を抽出・精製するためのキットです。
本キットでは、夾雑物を遠心分離により除去する方法を採用しており、今まで抽出困難であったポリフェノールや粘性物質を多く含む植物試料からも高純度なDNAを得ることができます。

特長

高粘性でDNA抽出困難なバラ科植物からも効率よくDNA抽出可能 フェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しない 自社開発のスピンカラムにより、高い操作性を実現 RNase A 添付（別途購入不要）

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製品内容

ISOSPIN Plant DNA (50回用)
構成品	容量	保存	備考
Prewash Buffer	30 ml x 1本	室温
PE1 Buffer	22.5 ml x 1本	室温
PE2 Buffer	2.5 ml x 1本	室温
PB Buffer	30 ml x 1本	室温	・エタノールが含まれています。蒸発を防ぐため速やかに蓋を閉めて下さい。・ボトルの口まわりに白い結晶が析出する場合があります。DNA 抽出操作には影響ありません。
PW1 Buffer	40 ml x 1本	室温	・エタノールが含まれています。蒸発を防ぐため速やかに蓋を閉めて下さい。・ボトルの口まわりに白い結晶が析出する場合があります。DNA 抽出操作には影響ありません。
PW2 Buffer	45 ml x 1本	室温	・エタノールが含まれています。蒸発を防ぐため速やかに蓋を閉めて下さい。
RNase A (100 mg/ml)	250 µl x 1本	室温	・RNase A を長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存（2～10℃）もしくは冷凍保存（－20℃）して下さい。
Elution Buffer	3 ml x 1本	室温	組成：10mM Tris-HCl (pH9.0), 0.1 mM EDTA (pH8.0)
Spin Column	50 本 x 1袋	室温	上部パーツ：カラム、下部パーツ：Collection Tube

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使用例

使用する試料量の目安

最初に使用する試料の量が多すぎると夾雑物の除去が不十分となり、DNA の収量と純度が著しく低下する恐れがあります。少量の試料から検討を始め、段階的に試料の量を増やしてお試しください。粘性物質などの夾雑物が少ない試料は、抽出プロトコール中のオプションPrewash Buffer 処理を省略できます。

オプション省略可能な試料（推奨の使用量）：　
ホウレンソウ（50 mg）、シロイヌナズナ（20 mg）、キャベツ（100 mg）、イネ（50 mg）、キク（50 mg）、マツ（20 mg）

オプション必須な試料（推奨の使用量）：　
イチゴ（20 mg）、バラ（50 mg）、サクラ（50 mg）、キウイ（20 mg）、スギ（10 mg ※実験例はこちら）

操作フロー

Data 1.　DNA収量の目安

上記の「使用する試料量の目安」に従って、試料量をはかり取り、DNA抽出を行った場合の収量の目安です。^*1

オプション省略可能な試料（試料 1mg あたりのDNA収量の目安）^*2：　
ホウレンソウ（40 ng）、シロイヌナズナ（80 ng）、キャベツ（50 ng）、イネ（90 ng）、キク（100 ng）、マツ（150 ng）

オプション必須な試料（試料 1mg あたりのDNA収量の目安）^*3：　
イチゴ（30 ng）、バラ（30 ng）、サクラ（30 ng）、キウイ（40 ng）、スギ（30 ng）

*1　使用する試料の量が多いと、収量が低下する原因になります。
*2　上記はオプション処理を省略したときのデータです。オプション処理を行ったときもほぼ同等の収量が得られます。
*3　オプション処理を行わないと、収量が低下する原因になります。

Data 2.　ホウレンソウからのDNA抽出

ISOSPIN Plant DNA マニュアルに記載のプロトコールに従い、ホウレンソウの葉からDNAを抽出しました。

Data 3.　スギ針葉からのDNA抽出

すりつぶし見本

ISOSPIN Plant DNA マニュアルに記載のプロトコール（オプションPreWash処理あり※）に従い、スギ針葉からDNAを抽出しました。
※PreWash処理：スギの葉に600μl の Prewash Buffer を加え、ペッスルですりつぶす。遠心（13,000×g、10 分間、4℃）して植物試料をペレットにした後で上清をすべて除去する。

高純度にDNAを回収するためのポイント

Prewash Bufferを加え、ペッスルで葉の組織がしっかりと崩れるまですりつぶす（写真参照）
PreWash後の溶液（上清はかなり粘性が高く糸を引く）をピペットで全て吸い取って捨てる
プロトコールを進め（PE2 Buffer を加えて遠心後）上清を回収する際、沈殿物や液表面の膜上の析出物をなるべく取らないように余裕をもって上清（スギの目安：350 μl）を新しいマイクロチューブに回収する。

掲載製品: OneSTEP Marker 6 (λ/Sty I digest)

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Q & A

植物の葉以外のサンプルからもDNAを抽出できますか？: 本キットを用いて、籾、栗（子葉）、サツマイモ、ブナシメジ（柄）からDNAを抽出できました。（2017.10.02時点）
キノコからDNAを抽出したい。: エノキ、シメジ、ナメコからDNAを抽出したことがあります。キノコ類はDNA分解酵素の活性が強いため、通常プロトコールよりもProteinase Kを加える改変プロトコールでお試しいただくことをお勧めします。（2021.11.30時点）
ISOSPIN Plant DNA を用いたキノコからのDNA抽出（改変プロトコール）
植物検体から粗抽出したDNA溶液を、ISOSPIN Plant DNA を用いて再精製する方法は？: 以下の再精製プロトコールをお試し下さい（オプションのPrewashと65℃のインキュベートは不要です）。

DNA溶液（100 μL以下）^*1
↓←450 μL PE1 Buffer
↓　［←5 μl RNase A (100 mg/ml)、混和、室温で10分間インキュベート］^*2
↓←50 μL PE2 Buffer、20秒間以上ボルテックス
遠心（13,000 x g, 10分間, 4℃）
↓
上清を新しいマイクロチューブに回収
↓←上清に対して等量のPB Bufferを加え、均質になるまで転倒混和
遠心（13,000 x g, 30秒間, 4℃）
↓
混合液を新しいマイクロチューブに回収
↓
Spin Columnに900 μLの混合液を添加
（以降の操作は、マニュアルに記載のプロトコールと同じ）