品名 | Code No. | 包装単位 | 価格 | 備考 |
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Template Prepper for Cell RNA | 318-09451 | 100回用 | 45,000円 | |
製造元 (株)ニッポンジーン
表示価格は希望納入価格 (税別) です。
Template Prepper for Cell RNA
「Template Prepper for Cell RNA」は、細胞から簡便にRNA を抽出するための試薬です。Template Prepper RAで細胞を溶解し、Template Prepper RB 、DNase II Solution 、RNase Inhibitor の混合液を添加するだけで、ゲノムDNAの混入の少ないRNA を短時間で抽出できます。
本品に含まれるDNase II は、酸性条件下のみで活性を示すため、一般的に中性以上のp H 条件下で行われる逆転写反応やPCR においては機能しません。そのため、熱処理やフェノール処理によるDNase の失活工程が不要で、抽出したRNA をそのままRT PCR 等の鋳型として利用することができます。
例)96ウェルプレートで培養した細胞からのRNA抽出
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構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
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Template Prepper RA | 1 mL × 2 本 | -20°C | |
Template Prepper RB | 1.25 mL × 2 本 | -20°C | Template Prepper RB は室温(25℃前後)に戻してからご使用ください。 |
DNase II Solution | 400 μL x 1 本 | -20°C | DNase II Solution は、本品のプロトコールに従った使用方法において最適化されています。本品以外の用途ではご使用いただけませんのでご注意ください。 |
RNase Inhibitor | 100 μL x 1 本 | -20°C |
1 x 102 ~ 1 x 104 個の細胞に対して標準プロトコール通り使用した場合、100回使用できます。
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本品およびA社品のプロトコールに従い、HeLa細胞 (1x104、1x103、1x102個)からRNAを抽出した。 抽出したRNAを鋳型とし、A社の1 Step RT-qPCR試薬を用いて、リアルタイムPCRの立ち上がりを比較した。
結果
本品で抽出したRNAを鋳型とした場合、各細胞数においてA社品よりも早い増幅曲線の立ち上がりを示した。
本品およびA社品のプロトコールに従い、HeLa細胞 (1x104、1x103、1x102個)からRNAを抽出した。抽出したRNAを鋳型とし、逆転写反応を行わずにGeneAce Probe qPCR Mix II (Code No.313-08823) を用いてリアルタイムPCRを行い、RNA溶液中の残留DNAの有無を確認した。
結果
本品で抽出したRNAは、逆転写を行わないリアルタイムPCRにおいて増幅が確認されなかったことから、DNAの残留が極めて少ないことが示唆された。
本品とB社品のプロトコールに従い、HeLa細胞からリアルタイムRT-PCR用鋳型RNAを調製した。B社の1 Step RT-qPCR試薬を用いて、リアルタイムPCRの立ち上がりを比較した。
結果
本品で抽出したRNAを鋳型とした場合、各細胞数においてB社品よりも早い増幅曲線の立ち上がりを示した。
実験例3ではB社の1 Step RT-qPCR試薬を使用したが、本実験では当社の「DirectAce qPCR Mix plus ROX Tube」 (Code No. 318-07751)と逆転写酵素「GeneAce Reverse Transcriptase」(Code No. 316-08151)を組み合わせて反応液を調製し、1 Step RT-qPCRを行った。鋳型RNAは、本品「Template Prepper for Cell RNA」を用いて調製した。
結果
本品で抽出したRNAを鋳型に、当社品のqPCR試薬と逆転写酵素を組み合わせた反応液で1 Step-RT qPCRを行った方が、B社の1 Step-RT qPCR試薬を用いた場合よりも立ち上がりが早くなった。(比較とする実験は実験例3をご参照ください)
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