Template Prepper for Cell RNA

簡易RNA抽出試薬

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Template Prepper for Cell RNA	318-09451	100回用	45,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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Template Prepper for Cell RNA

「Template Prepper for Cell RNA」は、細胞から簡便にRNA を抽出するための試薬です。Template Prepper RAで細胞を溶解し、Template Prepper RB 、DNase II Solution 、RNase Inhibitor の混合液を添加するだけで、ゲノムDNAの混入の少ないRNA を短時間で抽出できます。
本品に含まれるDNase II は、酸性条件下のみで活性を示すため、一般的に中性以上のp H 条件下で行われる逆転写反応やPCR においては機能しません。そのため、熱処理やフェノール処理によるDNase の失活工程が不要で、抽出したRNA をそのままRT PCR 等の鋳型として利用することができます。

特長

・室温約6分間の簡単操作でRNA抽出が可能。 ・ゲノムDNAの混入が少ないRNAが得られる。 ・抽出したRNA溶液は、そのままRT PCR等の鋳型として使用可能。 ・ 96ウェルプレート等の多検体からの抽出に最適。

例）96ウェルプレートで培養した細胞からのRNA抽出

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製品内容

Template Prepper for Cell RNA (Code No. 318-09451 )
構成品	容量	保存	備考
Template Prepper RA	1 mL × 2 本	-20°C
Template Prepper RB	1.25 mL × 2 本	-20°C	Template Prepper RB は室温（25℃前後）に戻してからご使用ください。
DNase II Solution	400 μL x 1 本	-20°C	DNase II Solution は、本品のプロトコールに従った使用方法において最適化されています。本品以外の用途ではご使用いただけませんのでご注意ください。
RNase Inhibitor	100 μL x 1 本	-20°C

使用回数

1 x 10² ～ 1 x 10⁴個の細胞に対して標準プロトコール通り使用した場合、100回使用できます。

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使用例

＊注）

細胞数は1 x 10⁴個を目安に、適切な細胞数を予備実験でご確認ください。
細胞数が少ない場合、抽出されるRNA量が不十分な可能性があります。また、細胞数が多い場合、ゲノムDNAを除去しきれない可能性があります。
96ウェルプレートを振とうする場合は、飛散しないように注意してください。
混合液は用時調製してください。
Template Prepper RBは、室温（25℃前後）に戻してからご使用ください。低温のまま使用すると、ゲノムDNAの分解が不十分になるおそれがあります。
ゲノムDNAの分解が不十分な場合、反応時間を15分まで延ばすことができます。それより長く反応をさせると、RNAが分解されるおそれがあるためご注意ください。
RNA溶液は速やかに氷上に移してください。
(HeLa細胞の場合、氷上で少なくとも3時間は安定で、−20℃では少なくとも48時間は保存可能です。)
本品で抽出したRNA溶液の添加量は、反応系の1/10量以下を推奨しています。

実験例１ HeLa細胞から抽出したRNAのリアルタイムPCR (1 Step RT-qPCR)

本品およびA社品のプロトコールに従い、HeLa細胞 (1x10⁴、1x10³、1x10²個)からRNAを抽出した。抽出したRNAを鋳型とし、A社の1 Step RT-qPCR試薬を用いて、リアルタイムPCRの立ち上がりを比較した。

Template Prepper Cell RNA 実験例1

結果
本品で抽出したRNAを鋳型とした場合、各細胞数においてA社品よりも早い増幅曲線の立ち上がりを示した。

実験例２抽出したRNA溶液中の残留DNAの確認

本品およびA社品のプロトコールに従い、HeLa細胞 (1x10⁴、1x10³、1x10²個)からRNAを抽出した。抽出したRNAを鋳型とし、逆転写反応を行わずにGeneAce Probe qPCR Mix II (Code No.313-08823) を用いてリアルタイムPCRを行い、RNA溶液中の残留DNAの有無を確認した。

Template Prepper Cell RNA 実験例2

結果
本品で抽出したRNAは、逆転写を行わないリアルタイムPCRにおいて増幅が確認されなかったことから、DNAの残留が極めて少ないことが示唆された。

実験例３ HeLa細胞から抽出したRNAのリアルタイムPCR (1 Step RT-qPCR)

本品とB社品のプロトコールに従い、HeLa細胞からリアルタイムRT-PCR用鋳型RNAを調製した。B社の1 Step RT-qPCR試薬を用いて、リアルタイムPCRの立ち上がりを比較した。

Template Prepper Cell RNA 実験例3

結果
本品で抽出したRNAを鋳型とした場合、各細胞数においてB社品よりも早い増幅曲線の立ち上がりを示した。

実験例４試薬の組み合わせ実験（1 Step RT-qPCR）

実験例3ではB社の1 Step RT-qPCR試薬を使用したが、本実験では当社の「DirectAce qPCR Mix plus ROX Tube」 (Code No. 318-07751)と逆転写酵素「GeneAce Reverse Transcriptase」(Code No. 316-08151)を組み合わせて反応液を調製し、1 Step RT-qPCRを行った。鋳型RNAは、本品「Template Prepper for Cell RNA」を用いて調製した。

Template Prepper Cell RNA 実験例4