GeneAce Probe qPCR Mix II

リアルタイムPCR用試薬（蛍光標識プローブ検出系）
定量PCR
品名 Code No. 包装単位 価格 備考
GeneAce Probe qPCR Mix II 313-08823 200反応用 24,000円 200反応用 (50 μl反応系), 120円/反応
500反応用 (20 μl反応系), 48円/反応
GeneAce Probe qPCR Mix II 317-08821 50反応用 11,000円 50反応用 (50 μl反応系)
125反応用 (20 μl反応系)

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

製品説明


GeneAce Probe qPCR Mix II 200反応用

GeneAce Probe qPCR Mix II は、リアルタイムPCR 用サーマルサイクラー（プレートタイプ）に対応した蛍光標識プローブ検出系のリアルタイムPCR用マスターミックス（2 x 濃度）です。
試薬が小分け分注されており、操作性に優れています。化学的な修飾を施されたホットスタートPCR用酵素を採用しており、非特異的増幅を抑制し、広範囲の鋳型濃度に対し精度の高い分析ができます。 また、別途Uracil-N-Glycosylase(UNG) を添加することでキャリーオーバー防止処理を行えます (本品にUNG は含まれていません。UNGがセットになった製品はこちらです)。
本品は、パッシブリファレンス色素が予め添加されているため、各種プレートタイプのリアルタイムPCR 装置に対応しています。

特長

・　圧倒的コストパフォーマンス（120円/50 µl反応系） ・　高い特異性と増幅効率 ・　SNPジェノタイピング実験に使用可能 ・　UNGを別途添加してキャリーオーバー防止処理が可能 ・　各種プレートタイプのリアルタイムPCR装置に対応（リファレンス色素添加済み）

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製品内容

使用回数

包装単位は50 µl反応系での使用回数です。

保存方法

－20°C（遮光）
4°C保存も可能ですが、1 ヶ月以内にご使用下さい。

・GeneAce Probe qPCR Mix II
構成品 200反応用 50反応用 形状
2 x GeneAce Probe qPCR Mix II 1.25 ml x 4 1.25 ml x 1 Hot-Start GeneTaq NT, dNTP Mixture (including dUTP)*1, Mg2+, stabilizers, Passive Reference dye*2
*1　本品にUNGは含まれておりません。別途UNGを添加することでキャリーオーバー防止処理を行えます。
*2　パッシブリファレンス色素が予め添加されているため、ROX補正の有無にかかわらず各種装置に対応しています。　 例）Applied Biosystems 7300/7700/7900HT, StepOne, Applied Biosystems 7500, ViiA, QuantStudio, Roche LightCycler 480 System, CFX等

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使用例

反応液組成（例）
2X GeneAce Probe qPCR Mix II 25 μl 12.5 μl (final conc. 1X)
25 μM Forward Primer 1 μl 0.5 μl  
25 μM Reverse Primer 1 μl 0.5 μl  
10 μM TaqMan® Probe 1 μl 0.5 μl  
Template DNA 5 μl 2.5 μl  
ddWater up to 50 μl up to 25 μl  

推奨PCR サイクル条件
95°C 10分 1サイクル 酵素活性化ステップ
95°C 30秒 45サイクル  
60°C 1分

・ 泡立てないように穏やかに転倒混和し、試薬を十分均一にしてからご使用下さい。
・ ご使用の装置に対応した反応液量でご使用下さい。
・ プライマーの設計や鋳型DNA 等により反応の至適条件が変わることがあります。
・ TaqMan®は、Roche Molecular systems 社の商標です。
・ プライマー対とプローブの設計によっては、熱変性時間は15 秒まで、伸長時間は30 秒まで短くすることもできます。
・ 反応液に別途UNG を添加した場合、酵素活性化ステップの前にUNG 処理を行えます。

実験例1　GeneAce Probe qPCR Mix II と他社製品の比較

ISOSPIN Cell & Tissue RNAを用いてHeLa細胞から抽出したTotal RNAから、GeneAce Reverse Transcriptaseを使用してｃDNAを合成し、従来品（GeneAce Probe qPCR Mix α Low ROX）およびC社製品と増幅効率を比較した。

Template：　
cDNAの段階希釈（RNA 相当量: 10 ng, 1 ng, 100 pg, 10 pg, 1 pg）
PCR condition：　
 95°C 10分→（95°C 30秒→60°C 1分） x 45サイクル
Target：　
 β-actin 一部領域
PCR volume：　
 25 μl
装置：　
 Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System

結果　　本品は、従来品およびC社製品と比較して最も早い立ち上がりを示した。検量線もCt値のばらつきが少なく高い直線性の結果が得られた。

実験例2　SNPジェノタイピング実験例

GeneAce Probe qPCR Mix II と FAMおよびVIC色素を使用した TaqMan MGB プローブ検出系試薬を用いて、31サンプルのヒト血液から抽出したゲノムDNAを鋳型にして（各2.5 ng/10 μl反応系）、β3AR遺伝子をターゲットにSNPジェノタイピング解析を行った。

SNPアッセイ：　
TaqMan MGBプローブ検出系（FAM/VIC）
Template：　
 ヒト血液ゲノムDNA（31人）
PCR condition：　
 95°C 10分→（95°C 30秒→60°C 1分） x 40サイクル
Target：　
 β3AR遺伝子
PCR volume：　
 10 μl
装置：　
 Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System

 

赤：野生型T/Tホモ（23人）
緑：T/Cヘテロ（6人）
青：変異型C/Cホモ（2人）
灰：鋳型DNAを含まないコントロール（NTC）

結果

GeneAce Probe qPCR Mix II を使用してSNPジェノタイピング解析を行うことができた。

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Q & A

【基礎編】

全てのリアルタイムPCR装置で使用可能ですか？
プレートタイプの装置に対応しております。一方、ガラスキャピラリータイプの装置には対応しておりません。
使用期限は？
－20°C保存で製造後2年間を使用期限とし、4°C保存の場合は約１ヶ月間の保存が可能です。
反応容量のスケールダウンは可能か？
推奨容量は25～50μlですが、装置に対応した反応容量に合わせてスケールダウンしていただくも可能です。
凍結融解による活性への影響はありますか？
凍結融解による活性への影響は認められておりません。弊社では40回凍結融解を繰り返しても、活性の低下は確認されませんでした。

【トラブルシューティング編】

増幅の立ち上がりが遅い。
１）　本品は化学修飾したホットスタートPCR酵素を用いています。そのため、酵素の活性化ステップ（95°C 10分）を条件通り行わないと十分な酵素活性が得られず増幅効率が低下します。
２）　推奨PCRサイクル条件であることをご確認ください。
３）　ABI リアルタイムPCR装置のランモード「Fast」における標準プロトコール（95°C 20秒→（95°C 3秒→60°C 30秒） x 40サイクル）には対応しておりません。

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資料 Data Sheet

製品マニュアル

SDS(Safety Data Sheet)

リーフレット

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関連情報

備考

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問い合わせ先

購入に関するお問い合わせ先
富士フイルム和光純薬株式会社および同社代理店・特約店
富士フイルム和光純薬株式会社　製品検索サイト
製品に関するお問い合わせ先
株式会社ニッポンジーン　学術営業課

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