Uracil-DNA Glycosylase (UNG)

E. coli 由来 ウラシルDNA グリコシラーゼ（UNG）
定量PCR
品名 Code No. 包装単位 価格 備考
Uracil-DNA Glycosylase (UNG) 317-09041 100 ng 32,000円  
 

関連製品
品名 Code No. 包装単位 価格 備考
GeneAce Probe qPCR Mix II with UNG 314-09051 1 Set (200 回用) 51,000円 リアルタイムPCR 用試薬と本酵素のセット品
GeneAce Probe qPCR Mix II 313-08823 200反応用 (50 μl反応系) 24,000円 本品にUNG は含まれておりません。
GeneAce SYBR™ qPCR Mix II 313-09423 500反応用 (20 μl反応系) 24,000円 本品にUNG は含まれておりません。

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

製品説明

本品は、E. coli 由来のウラシルDNA グリコシラーゼ（UNG）です。ウラシルを含むDNA のデオキシリボースとウラシル残基の間のN-グリコシド結合を加水分解し、脱ピリミジン部位をつくります。

UNG は、PCR のキャリーオーバー対策に利用できます。PCR を行う際、UNG 処理を行うことで、前の反応から持ち込まれたPCR 産物（ウラシルを含む）を除くことができます。

UNG処理対応可能なリアルタイムPCR用試薬について

GeneAce Probe qPCR Mix II やGeneAce SYBR™ qPCR Mix II は、dTTPの代わりにdUTPが含まれているため、ウラシルを取り込んだPCR産物が得られます。次のPCRを行う際に、添付のUNGを添加し、PCR前に40℃で2分間のUNG処理を行うことで、鋳型DNAには影響を与えず、キャリーオーバーしたPCR産物を分解することができます。

特長

・　UNGを添加してPCRキャリーオーバー防止！

▲このページのトップへ

製品内容

使用回数

200回用（包装単位は50 µl反応系での使用回数です。）

・Uracil-DNA Glycosylase (UNG)　（100 ng）
構成品 容量 保存 備考
Uracil-DNA Glycosylase (UNG) 100 µl x 1 －20°C 濃度： 1 ng /μL
・GeneAce Probe qPCR Mix II with UNG (1 Set)
構成品 容量 保存 備考
2 x GeneAce Probe qPCR Mix II 1.25 ml x 4 －20°C（遮光） 200反応用（製品 Code No. 313-08823）
Uracil-DNA Glycosylase (UNG) 100 µl x 1 －20°C 100 ng （製品 Code No. 317-09041）

▲このページのトップへ

使用例

反応液組成（例）
UNG (1 ng /μL) 0.5μl 0.25μl  
2X GeneAce Probe qPCR Mix II 25μl 12.5μl (final conc. 1X)
25μM Forward Primer 1μl 0.5μl  
25μM Reverse Primer 1μl 0.5μl  
10μM TaqMan® Probe 1μl 0.5μl  
Template DNA 5μl 2.5μl  
ddWater up to 50μl up to 25μl  

推奨PCR サイクル条件
40°C 2分 1サイクル UNG 処理
95°C 10分 1サイクル UNG 不活化,
PCR 酵素活性化
95°C 30秒 45サイクル  
60°C 1分

 

実験例1　UNGの活性確認

各濃度の UNG と dUTPを取り込んだ 1μg のPCR産物（0.5 kb）を 37℃で30分間反応させ、UNG 活性によりDNA が分解されているかアガロースゲル電気泳動で確認した。

結果　　ウラシルを含むPCR産物はUNGにより分解された。

実験例2　PCR キャリーオーバーコンタミネーション防止効果の検証

ウラシルを含む PCR 産物を鋳型とし、リアルタイム PCR を行った。 リアルタイム PCR は、UNG の添加量（0μL, 0.1μL, 0.25μL, 0.5μL/反応）を変えて UNG 処理を行ってから、PCR 酵素活性化処理（UNG 不活化）と PCRを行った。

PCR condition：　
 40°C 2分→95°C 10分→（95°C 30秒→59°C 1分） x 45サイクル
Target：　
 ダイズ内在性遺伝子 Le1（118 bp）
PCR volume：　
 25 μl
試薬：　
 GeneAce Probe qPCR Mix II
装置：　
 LightCycler® 96（Roche社）

 

結果

UNG 添加なしの場合、ウラシルを含む鋳型で増幅が認められたが、UNG 添加ありの場合には増幅は認められず、ウラシルを含むDNAからの増幅を抑制できた。

実験例3　UNGの添加によるリアルタイムPCRへの影響

プラスミドDNA（ウラシルを含まない）を鋳型としたリアルタイムPCRを行い、UNGの添加による増幅効率の比較を行った。

Target：　
 ダイズ内在性遺伝子 Le1（118 bp）
PCR volume：　
 25 μl
試薬：　
 GeneAce Probe qPCR Mix II
装置：　
 Applied Biosystemns 7500 Fast System
UNG添加量：　
 0.25 ng/反応

結果

増幅曲線および検量線の結果から、UNGの添加によるリアルタイムPCRへの影響は認められなかった。

▲このページのトップへ

Q & A

UNGの添加量を増やしてもよいですか？
PCR反応液中へ本酵素の持ち込み量が多くなりすぎるとPCR反応を阻害することがあります。 酵素の使用量は、50 μL の反応液中、0.1～1 μL を目安にしてください。
1 step RT-PCR に使用できますか？
本酵素は55℃でも部分的に活性を有するため、1 step RT-PCR には使用しないでください。

▲このページのトップへ

資料 Data Sheet

製品マニュアル

SDS(Safety Data Sheet)

リーフレット

▲このページのトップへ

関連情報

備考

関連製品

問い合わせ先

購入に関するお問い合わせ先
富士フイルム和光純薬株式会社および同社代理店・特約店
富士フイルム和光純薬株式会社　製品検索サイト
製品に関するお問い合わせ先
株式会社ニッポンジーン　学術営業課

ページトップ