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製品説明

ローディングバッファーは、電気泳動用核酸サンプルを調製する際に添加する試薬です。ローディングバッファーには、アプライの際にウェル（ゲルの穴）の中にDNAサンプルが沈むよう比重を増やすためのグリセロールまたはフィコールと、電気泳動の進行を観察できる色素が含まれています。色素は、種類によって流れる速度が異なります。

Loading Buffer

試料容量に対して1/5～1/10量加えて使用します。2種の色素（ブロモフェノールブルーとキシレンシアノール）とGlycerolが入っています (上図①)
本品にはSDSが含まれているため、DNAと結合タンパク質（Taq MutSなど）の電気泳動パターンに影響することがあります。一方、酵素反応を終了させたい場合や、タンパク質量が多い試料溶液の場合にはSDSが含まれている方が泳動度への影響が少なくなります。

6 x Loading Buffer (Orange G, Double Dye, Triple Dye)

試料容量に対して1/6量加えて使用します。Triple Dyeは色素として、泳動物のほぼ先端を確認できるOrange G、Bromophenol Blue（BPB）、高分子の泳動度を確認できるXylene Cyanol FF（XC）を採用しています。 (上図④)
Orange GやDouble Dye では、BPBを使用しないことで、写真撮影時にはゲル中央部に色素影の無いUV写真を撮影することができます。 (上図②、③)
比重添加剤にはFicoll® PM400を使用しており、グリセロールに比べてバンドのスマイリングが起こりにくくなっています。

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製品内容

Loading Buffer

構成品	容量	保存	備考
Loading Buffer	10 ml x 1	室温	0.02%(w/v) Bromophenol Blue, 0.02%(w/v) Xylene Cyanol FF, 50%(v/v) Glycerol, 1%(w/v) SDS

6 x Loading Buffer Triple Dye

構成品	容量	保存	備考
6 x Loading Buffer Triple Dye	1 ml x 3	室温	0.3%(w/v) Orange G, 0.03%(w/v) Bromophenol Blue, 0.03%(w/v) Xylene Cyanol FF, 15%(w/v) Ficoll® PM400, 10 mmol/l Tris HCl(pH7.5), 50 mmol/l EDTA (pH 8.0)

6 x Loading Buffer Double Dye

構成品	容量	保存	備考
6 x Loading Buffer Double Dye	1 ml x 3	室温	0.3%(w/v) Orange G, 0.03%(w/v) Xylene Cyanol FF, 15%(w/v) Ficoll® PM400, 10 mmol/l Tris HCl(pH7.5), 50 mmol/l EDTA (pH8.0)

6 x Loading Buffer Orange G

構成品	容量	保存	備考
6 x Loading Buffer Orange G	1 ml x 3	室温	0.3%(w/v) Orange G, 15%(w/v) Ficoll® PM400, 10 mmol/l Tris HCl(pH7.5), 50 mmol/l EDTA (pH 8.0)

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使用例

6 x Loading Buffer の使用例

1. DNAサンプル溶液 10 µlに対して、6 x Loading Bufferを2 µl 加え、数回ピペッティングして混合します（12 μlになるよう必要に応じてTE(pH 8.0)を添加）。
2. そのうち10 µl をアガロースゲルのウェルに静かに注入（アプライ）し、電気泳動を行います。

泳動度対応表

アガロースゲル	Orange G	Bromophenol Blue	Xylene Cyanol FF
1% Agarose S	約 100 bp	約 900 bp	約 5,000 bp
2% Agarose S	約 30 bp	約 300 bp	約 1,500 bp
3% Agarose 21	約 10 bp	約 100 bp	約 500 bp

実験例1　電気泳動（写真撮影時の色素影の観察）

各サンプル（Marker 4　0.2µg/15µl、PCR産物　50ng/15µl、TE Buffer 15µl）に 6 x Loading Buffer を3µl加えて、写真撮影時に色素影を観察できるよう全量の18µlを3% Agarose21ゲルにアプライ後、100Vで30分間電気泳動を行った。EtBr入りバッファー（TAE Buffer 100mlに10mg/ml EtBrを5µl加えたバッファー）にゲルを浸したあと軽く振とうしながら10分間染色した。染色後のゲルを、水をいれたバットに移して浸し、15分から20分ほど放置して脱色させた後、撮影した。

電気泳動像（左）と、UV照射像（右）
A: Xylene Cyanol FF（青色）
B: Bromophenol Blue（紫色）
C: Orange G（黄色）

Lane No.	泳動サンプル	ローディングバッファー
1	Marker 4(φX174/Hae III)	6 x Loading Buffer Triple Dye
2		6 x Loading Buffer Orange G
3	PCR産物(299 bp) 50 ng	6 x Loading Buffer Triple Dye
4		6 x Loading Buffer Orange G
5	TE Buffer (negative control)	6 x Loading Buffer Triple Dye
6		6 x Loading Buffer Orange G

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資料 Data Sheet

製品マニュアル

• Loading Buffer　製品説明書(PDF)
• 6 x Loading Buffer Double Dye　製品説明書(PDF)
• 6 x Loading Buffer Triple Dye　製品説明書(PDF)
• 6 x Loading Buffer Orange G　製品説明書(PDF)

SDS(Safety Data Sheet)

• Loading Buffer　安全データシート(PDF)
• 6 x Loading Buffer Double Dye　安全データシート(PDF)
• 6 x Loading Buffer Triple Dye　安全データシート(PDF)
• 6 x Loading Buffer Orange G　安全データシート(PDF)

技術情報

• ゲル電気泳動マーカー色素移動度の目安

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関連情報

バッファーの品質管理

• D 電気泳動試験：Loading Buffer、各6 x Loading Bufferにおいて、通常の電気泳動が支障なく行えることを確認している。

備考

• 本品は試験研究用試薬です。医薬品の用途には使用しないでください。

参考文献

• Sambrook, J. et al. ：“Molecular Cloning”, A Laboratory Manual, 2nd ed.（1989）

関連製品

• 10 X TAE
• 50 X TAE
• 5 X TBE
• EtBr Solution
• CLEAR STAIN Blue (安全な核酸染色用試薬)
• マーカー (電気泳動)
• Agarose (電気泳動)

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