Hot-Start Gene Taq

ホットスタートPCR

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Hot-Start Gene Taq	319-07041	250 units	26,500円
Hot-Start Gene Taq	315-07043	250 units x 4	93,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

本品は、ホットスタートPCR 用の耐熱性DNA ポリメラーゼです。PCR サイクルに入る前に95°C、5 分間の熱処理によって酵素の活性化処理を行います。本品は、宿主菌由来のDNA のコンタミを極力抑えた改変型Taq DNA ポリメラーゼである「Gene Taq FP」に化学的な修飾を施しています。得られた PCR 産物はTA クローニングに使用することができます。
本品には、従来からある 10 x Gene Taq Universal Buffer と、10 x Brilliant Buffer の2 種類の反応バッファーを添付しています。PCR の特異性を上げたい場合、10 x Brilliant Buffer は短鎖 DNA （特に1.5 kb以下）の増幅において有効なバッファーです。

特長

・高い特異性と高い DNA 収量・Hot-Start 機能を持ち、室温での反応液調製が可能・マルチプレックス PCR に最適・実験条件に合わせて使い分けできる2種類のバッファーを添付

用途

ホットスタートPCR
マルチプレックスPCR

M.W.	68 kDa
活性	2.5 units/µl
形状	20 mmol/l Tris-HCl(pH 8.0), 100 mmol/l KCl, 0.1 mmol/l EDTA, 0.5% Tween 20, 1 mmol/l DTT, 50% Glycerol
単位の定義	1 unit は、activated calf thymus DNA をプライマー/ 鋳型として74°C、30 分間に10 nmol のデオキシヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性とする。
純度	本酵素10 units と1 µg のλ/Hind III digest とを74°C、１時間反応させてもアガロースゲル電気泳動のパターンに変化は認められない。

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製品内容

Hot-Start Gene *Taq*（250 units）
構成品	容量	保存
Hot-Start Gene Taq	250 units x 1	-20°C
dNTP Mixture（2.5 mmol/l each）	800 µl x 1	-20°C
10 x Gene Taq Universal Buffer (15 mmol/l Mg²⁺ )	1 ml x 1	-20°C
10 x Brilliant Buffer (20 mmol/l Mg²⁺ )	1 ml x 1	-20°C

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使用例

ご使用になるPCR機器やプライマー配列、鋳型DNAなどによりPCR反応の至適条件は異なります。本プロトコールはあくまで参考データとしてご使用ください。

プロトコール例（1）　2-Step PCR

ゲノムDNAを鋳型とした、約500 bp フラグメントの2-Step PCRプロトコール例です。

反応液組成
Template DNA	50 - 100 ng
10 x Brilliant buffer	5 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)	4 μl
10 μM Primer-forward	1 μl
10 μM Primer-reverse	1 μl
Hot-Start Gene Taq (2.5 units/μl)	0.5 μl
d.d.H2O	up to 50 μl

PCR条件
95°C	5分
95°C	30秒	30サイクル
68°C	90秒	30サイクル
68°C	3分
4°C	-

電気泳動（PCR products 5 µl）

プロトコール例（2）　3-Step PCR

ゲノムDNAを鋳型として、約500 bpのフラグメントの3-Step PCRプロトコール例です。

反応液組成
Template DNA	50 - 100 ng
10 x Brilliant buffer	5 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)	4 μl
10 μM Primer-forward	1 μl
10 μM Primer-reverse	1 μl
Hot-Start Gene Taq (2.5 units/μl)	0.5 μl
d.d.H2O	up to 50 μl

PCR条件
95°C	5分
95°C	30秒	35サイクル
60°C	30秒
72°C	60秒
72°C	3分
4°C	-

電気泳動（PCR products 5 µl）

実験例1　マルチプレックスPCR

Plasmid DNAを鋳型として9対のプライマーにてマルチプレックスPCRを行なった。製品に添付されている2種類の反応バッファーで比較した。

Lane M：OneSTEP Marker 11
Lane 1：Hot-Start Gene Taq 　Brilliant buffer
Lane 2：Hot-Start Gene Taq 　Universal buffer
Lane 3：N社改変型 DNA polymerase

Brilliant Buffer　は短鎖DNA（1.5 kb以下）の
増幅に最適化している。

反応液組成
鋳型DNA	2.5 µl
Primer Mixture	1 µl
Reaction Buffer	1X
dNTP Mixture	0.2 mM
Polymerase	0.3 U
total	50 µl

PCR（ABI2720）条件
95°C	30 sec.	10 cycles
65°C	1 min.
72°C	1 min.
95°C	30 sec.	27 cycles
60°C	1 min.
72°C	1 min.
72°C	7 min.

実験例2　シャトルPCR

HeLa DNA（50 ng）を鋳型として、下記3種類の増幅困難なプライマーに対してシャトルPCRを行なった。

プライマー（鎖長：500 bp）
A-1	F	5'-AGTGGGCAGAGCCAGTCACT-3'
A-1	R	5'-AGACTGGATGCCCAGCCTAA-3'
A-2	F	5'-CAGACTCTGGGGCTGCCCAT-3'
A-2	R	5'-TCAAACACTGGCTTGGGGTA-3'
A-3	F	5'-CCTTGGAGCAATGAGCAATG-3'
A-3	R	5'-CATCTTTCCAGGCTCCTTCC-3'