Rapid Indel Detection Kit

DNA 変異検出キット

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Rapid Indel Detection Kit	313-08921	50 回用	30,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

「Rapid Indel Detection Kit」は、ゲノム編集技術による変異導入を迅速に確認できるキットです。本品は、簡易DNA抽出試薬、高正確性PCR酵素、変異（挿入または欠失：Indel）の検出に使用するT7 Endonuclease I reaction Mixで構成されています。

特長

・細胞から約15分間で迅速にDNAを抽出可能。 ・ PCRと電気泳動で簡単に変異の有無を検出可能。 ・変異導入クローンのスクリーニングが可能。

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製品内容

Rapid Indel Detection Kit （50回用）
構成品	容量	保存	備考
Template Prepper A	1.3 ml x 2 本	-20°C	Template Prepper Aは 4℃または室温保存可能
Template Prepper B	1.3 ml x 2 本	-20°C	Template Prepper Bは 4℃または室温保存可能
2 x Go-to PCR Mix	625 μl x 1 本	-20°C
T7 Endonuclease I reaction Mix	50 μl x 1 本	-20°C

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使用例

使用例 1. DNA抽出とPCR増幅

図1. PCR産物のアガロースゲル電気泳動像

本キットの抽出試薬とPCR酵素を用いて、5×10⁵ 個のHeLa細胞からゲノムDNAを抽出し各種遺伝子の一部領域をPCR増幅した。

結果

DNA抽出とPCR増幅を確認できた。

使用例 2. Indel切断の確認

図2. T7 Endonuclease Iで切断されたDNA断片

18塩基を欠失させたDNA断片と、欠失のないDNA断片の割合が理論上5～50％になるように調製したDNAを鋳型に2 x Go-to DNA Mixを用いてPCR増幅した。熱変性、再アニールしたPCR産物とT7 Endonuclease I reaction Mixを反応させた後、電気泳動を行った。

結果

変異の割合が5％でも検出することができた。

使用例 3. ゲノム編集マウスのホモ（または野生型）及びヘテロの個体識別

本キットを用いて、F2世代のゲノム編集マウスについて、ホモ（または野生型）、ヘテロの個体識別を行った。マウス尾または指から抽出したゲノムDNAを鋳型に、標的部位を含む領域をPCRで増幅した。

PCR産物を熱変性によりかい離させ、再アニールした二本鎖DNAを基質とし、T7 Endonuclease I reaction Mixで反応させた後、アガロースゲル電気泳動を行った。また、同時にシークエンス解析を行い、ホモ（または野生型）、ヘテロの判定を行った。

　　　　　　　　図3.　本キットを用いたゲノム編集マウスのホモ（または野生型）、ヘテロの個体識別結果