ISOSPIN Cell & Tissue RNA

動物細胞や組織からのRNA 抽出キット

マウス心臓からのRNA抽出（改変プロトコール）

心臓、骨格筋組織、軟骨は硬く繊維等も多いため、通常プロトコールでは効率よくRNAを回収することが困難です。そこで、Proteinase Kを用いた改変プロトコールでマウス心臓からのRNA抽出を試みました。

① 1.5mL容チューブにマウス心臓を（5mg前後）測り取る。
② 450μlのPT Extraction Bufferを加えてペッスルでよくすりつぶす。
③ 140μlのD.W. (RNase Free)と10μlのProteinase Kを加えよく混和する。
④ 56℃で10分間加温する。
⑤ 10,000×g～13,000×gで3分間遠心する。
⑥ 油膜状物や沈殿物を取らないように上清を新しい1.5ｍL容チューブに移す。
⑦ ⑥の上清（通常600μl）に1/2量（300μl）のエタノールを加えてよく混和する。
⑧ ⑦のエタノール混合物（900μl）を全量、Spin Columnにアプライする。
⑨ 8,000×g以上（13,000×g以下）で15秒間以上（1分間以下）遠心し、ろ液を捨てる。
⑩ Spin Columnを500μlのPT Wash1 Bufferで洗浄する（8,000×g～13,000×g、15秒間～1分間）。
⑪ ろ液を捨てて、DNase I溶液（87.5μl D.W. + 10μl 10xBuffer + 2.5μl(30units) DNase I = 100μl ）をアプライし、 15分間静置する。
⑫ Spin Columnを300μlのPT Wash1 Bufferで洗浄する（8,000×g～13,000×g、15秒間～1分間）。
⑬ ろ液を捨てて、Spin Columnを600μl PT Wash2 Bufferで洗浄する（8,000×g～13,000×g、2分間）。
⑭ カラム上部を新しい1.5mL容チューブに乗せる。
⑮ 20～50μl のD.W. (RNase Free)をカラムにアプライし、3分間静置する。
⑯ 8,000×g～13,000×gで2分間遠心し、RNAを溶出する。

RNAの収量・純度

マウス心臓からのRNA抽出では、Proteinase Kを用いた改変プロトコールによって、収量が改善された。

関連製品：
Gene Keeper RNA & DNA stabilization solution （核酸抽出用試料保存液）
GM quicker 2 Enzyme Set（Proteinase K と α-Amylase のセット品）

▲このページのトップへ

ページトップ