ISOGEN、ISOGEN-LS

RNA抽出用試薬

実験データ

Data 1： 収量の目安
Data 2：＜ISOGEN＞ISOGEN法とチオシアン酸グアニジン-塩化セシウム（GT-CsCl）超遠心法の比較
Data 3：＜ISOGEN＞ISOGEN法で単離した総RNAの電気泳動
Data 4：＜ISOGEN＞RNA、DNA及びタンパク質のNorthern、Southern、Westernブロッティング
Data 5：＜ISOGEN-LS＞ISOGEN-LSで単離したhepatitis C viral （HCV） RNAを用いたRT-PCR

Data 1: 収量の目安


＜RNA＞

試料
収量
tissue mouse liver 6〜10 µg RNA/mg tissue
spleen 6〜10 µg RNA/mg tissue
kidney 3〜4 µg RNA/mg tissue
skeletal 1〜1.5 µg RNA/mg tissue
brain 1〜1.5 µg RNA/mg tissue
placenta 1〜4 µg RNA/mg tissue
ラットまたは下垂体または 4〜8 µg RNA/mg tissue
ヒト肝針生検材料
plant ArabidopsisまたはTobacco 150〜200 µg RNA/0.5〜1 g weight tissue
culture cells epithelial 8〜15 µg RNA/106cell
fibroblasts 5〜7 µg RNA/106 cell
blood (ヒトまたは動物) 7〜15 µg RNA/ml blood

 

＜DNA＞

試料
収量
tissue liver 3〜4 µg DNA/mg tissue
kidney 3〜4 µg DNA/mg tissue
skeletal 2〜3 µg DNA/mg tissue
brain 2〜3 µg DNA/mg tissue
placenta 2〜3 µg DNA/mg tissue
culture cells（human, rat, mouse） 5〜7 µg DNA/106 cells

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Data 2: ISOGEN法とチオシアン酸グアニジン－塩化セシウム（GT-CsCl）超遠心法の比較


ISOGEN法
GT-CsCl超遠心法
総RNAa
β-actin mRNAb
総RNAa
β-actin mRNAb
ヒト乳房上皮細胞
7.0±0.4
4.1±0.3
5.6±0.6
3.1±0.2
ラット乳房
4.7±0.2
6.7±0.6
3.4±0.4
5.0±0.4
マウス肝
7.4±0.4
5.7±0.3
4.8±0.4
3.9±0.4

a.　µg/mg組織あるいは106 細胞
b.　β -actin cDNAを用いたノーザン分析におけるデンシトメータ単位/mg組織あるいは106 細胞

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Data 3： ISOGEN法で単離した総RNAの電気泳動

 

TotalRNAPhoto1

・lane1-3　ラット胸腺RNA（3 µg/lane）
・lane4-6　ヒト乳房上皮細胞RNA（5 µg/lane）

ホルムアルデヒド-（1%）アガロース電気泳動
臭化エチジウム染色

TotalRNAPhoto2

・lane1　ラット胸腺RNA（3 µg/lane）
・lane2　ラット胸腺RNA（3 µg/lane）
・lane3　ラット胸腺RNA（3 µg/lane） RNase処理（5 µg/ml, 30min., 37°C）
・lane4　ラット胸腺RNA（3 µg/lane） DNase処理（50 units, 30min., 37°C）

ホルムアルデヒド-（1%）アガロース電気泳動
臭化エチジウム染色
TptalRNAPhoto3

・lane1　ラット胸腺RNA（3 µg/lane）
・lane2　ラット胸腺RNA（3 µg/lane）
・lane3　ラット胸腺RNA（3 µg/lane） RNase処理（5 µg/ml, 30min., 37°C）
・lane4　ラット胸腺RNA（3 µg/lane） DNase処理（50 units, 30min., 37°C）
・lane5　BPB

ホルムアルデヒド-（1%）アガロース電気泳動後ナイロンメンブレンにブロッティング
メチレンブルー染色

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Data 4：RNA、DNA及びタンパク質のNorthern、Southern、Westernブロッティング

A : 成長ホルモン（GH）cDNAを用いて、総RNA（5 µg/lane）中のGHmRNA（1 kb）をNorthern分析した。
B : GHcDNAを用いて、EcoRⅠで消化した総DNA（5 µg/lane）中のGH遺伝子断片（11.4 kb）をSouthern分析した。
C : 抗GH抗体を用いて、総タンパク質（50 µg/lane）中のGH（22 kDa）をWestern分析した。

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Data 5： ISOGEN-LSで単離したhepatitis C viral （HCV） RNAを用いたRT-PCR

 

A : ヒト血清から単離されたHCV RNAを用いてnested PCR法により得られたHCVに特異的なPCR産物。

RR-PCR1
  • lane 1　RNAなし
  • lane 2　RCR産物（GR93-74）
  • lane 3　HCVネガティブコントロール
  • lane 4　RCR産物（GR93-72）
  • lane 5　HCVポジティブコントロール
左レーン : ヒト血清0.15 mlから抽出されたRNA
右レーン : ヒト血清0.3 mlから抽出されたRNA

臭化エチジウムにより染色されたゲル上に256 bpのHCVに特異的なPCR産物が認められる。

 

B : ヒト血清及び肝臓から単離されたHCV RNAを用いてRT-PCR法により得られたHCVに特異的なPCR産物。

RT-PCR
  • lane 1　RNAなし
  • lane 2　HCVネガティブコントロール（ヒト血清）
  • lane 3　HCVポジティブコントロール（ヒト血清）
  • lane 4　RCR産物（GR93-84）（ヒト血清）
  • lane 5　RCR産物（GR93-82）（ヒト肝臓バイオプシー）
  • lane 6　RCR産物（GR93-76）（ヒト血清）
  • lane 7　HCVネガティブコントロール（ヒト血清）

臭化エチジウムにより染色されたゲル上に272 bpのHCVに特異的なPCR産物が認められる。

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