ISOGEN、ISOGEN-LS

RNA抽出用試薬

実験データ

Data 1: 収量の目安
Data 2:<ISOGEN>ISOGEN法とチオシアン酸グアニジン-塩化セシウム(GT-CsCl)超遠心法の比較
Data 3:<ISOGEN>ISOGEN法で単離した総RNAの電気泳動
Data 4:<ISOGEN>RNA、DNA及びタンパク質のNorthern、Southern、Westernブロッティング
Data 5:<ISOGEN-LS>ISOGEN-LSで単離したhepatitis C viral (HCV) RNAを用いたRT-PCR

Data 1: 収量の目安


<RNA>

試料
収量
tissue mouse liver 6〜10 µg RNA/mg tissue
spleen 6〜10 µg RNA/mg tissue
kidney 3〜4 µg RNA/mg tissue
skeletal 1〜1.5 µg RNA/mg tissue
brain 1〜1.5 µg RNA/mg tissue
placenta 1〜4 µg RNA/mg tissue
ラットまたは下垂体または 4〜8 µg RNA/mg tissue
ヒト肝針生検材料
plant ArabidopsisまたはTobacco 150〜200 µg RNA/0.5〜1 g weight tissue
culture cells epithelial 8〜15 µg RNA/106cell
fibroblasts 5〜7 µg RNA/106 cell
blood (ヒトまたは動物) 7〜15 µg RNA/ml blood

 

<DNA>

試料
収量
tissue liver 3〜4 µg DNA/mg tissue
kidney 3〜4 µg DNA/mg tissue
skeletal 2〜3 µg DNA/mg tissue
brain 2〜3 µg DNA/mg tissue
placenta 2〜3 µg DNA/mg tissue
culture cells(human, rat, mouse) 5〜7 µg DNA/106 cells

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Data 2: ISOGEN法とチオシアン酸グアニジン-塩化セシウム(GT-CsCl)超遠心法の比較


ISOGEN法
GT-CsCl超遠心法
総RNAa
β-actin mRNAb
総RNAa
β-actin mRNAb
ヒト乳房上皮細胞
7.0±0.4
4.1±0.3
5.6±0.6
3.1±0.2
ラット乳房
4.7±0.2
6.7±0.6
3.4±0.4
5.0±0.4
マウス肝
7.4±0.4
5.7±0.3
4.8±0.4
3.9±0.4

a. µg/mg組織あるいは106 細胞
b. β -actin cDNAを用いたノーザン分析におけるデンシトメータ単位/mg組織あるいは106 細胞

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Data 3: ISOGEN法で単離した総RNAの電気泳動

 

TotalRNAPhoto1

・lane1-3 ラット胸腺RNA(3 µg/lane)
・lane4-6 ヒト乳房上皮細胞RNA(5 µg/lane)

ホルムアルデヒド-(1%)アガロース電気泳動
臭化エチジウム染色

TotalRNAPhoto2

・lane1 ラット胸腺RNA(3 µg/lane)
・lane2 ラット胸腺RNA(3 µg/lane)
・lane3 ラット胸腺RNA(3 µg/lane) RNase処理(5 µg/ml, 30min., 37°C)
・lane4 ラット胸腺RNA(3 µg/lane) DNase処理(50 units, 30min., 37°C)

ホルムアルデヒド-(1%)アガロース電気泳動
臭化エチジウム染色

TptalRNAPhoto3

・lane1 ラット胸腺RNA(3 µg/lane)
・lane2 ラット胸腺RNA(3 µg/lane)
・lane3 ラット胸腺RNA(3 µg/lane) RNase処理(5 µg/ml, 30min., 37°C)
・lane4 ラット胸腺RNA(3 µg/lane) DNase処理(50 units, 30min., 37°C)
・lane5 BPB

ホルムアルデヒド-(1%)アガロース電気泳動後ナイロンメンブレンにブロッティング
メチレンブルー染色

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Data 4:RNA、DNA及びタンパク質のNorthern、Southern、Westernブロッティング

A : 成長ホルモン(GH)cDNAを用いて、総RNA(5 µg/lane)中のGHmRNA(1 kb)をNorthern分析した。
B : GHcDNAを用いて、EcoRⅠで消化した総DNA(5 µg/lane)中のGH遺伝子断片(11.4 kb)をSouthern分析した。
C : 抗GH抗体を用いて、総タンパク質(50 µg/lane)中のGH(22 kDa)をWestern分析した。

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Data 5: ISOGEN-LSで単離したhepatitis C viral (HCV) RNAを用いたRT-PCR

 

A : ヒト血清から単離されたHCV RNAを用いてnested PCR法により得られたHCVに特異的なPCR産物。

RR-PCR1
  • lane 1 RNAなし
  • lane 2 RCR産物(GR93-74)
  • lane 3 HCVネガティブコントロール
  • lane 4 RCR産物(GR93-72)
  • lane 5 HCVポジティブコントロール
左レーン : ヒト血清0.15 mlから抽出されたRNA
右レーン : ヒト血清0.3 mlから抽出されたRNA

臭化エチジウムにより染色されたゲル上に256 bpのHCVに特異的なPCR産物が認められる。

 

B : ヒト血清及び肝臓から単離されたHCV RNAを用いてRT-PCR法により得られたHCVに特異的なPCR産物。

RT-PCR
  • lane 1 RNAなし
  • lane 2 HCVネガティブコントロール(ヒト血清)
  • lane 3 HCVポジティブコントロール(ヒト血清)
  • lane 4 RCR産物(GR93-84)(ヒト血清)
  • lane 5 RCR産物(GR93-82)(ヒト肝臓バイオプシー)
  • lane 6 RCR産物(GR93-76)(ヒト血清)
  • lane 7 HCVネガティブコントロール(ヒト血清)

臭化エチジウムにより染色されたゲル上に272 bpのHCVに特異的なPCR産物が認められる。

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