新しいゲノム編集技術『CRISPR-Cas3』について

パンフレット（2024年3月改訂版）ダウンロード

CRISPR-Cas3技術は、東京大学医科学研究所先進動物ゲノム研究分野の真下知士教授、大阪大学微生物病研究所の竹田潤二招へい教授らの研究成果を基に開発された日本発のゲノム編集技術です。

CRISPR-Cas3 技術は、オフターゲット変異が少なく安全性が高いことやターゲット遺伝子とその周辺を広く削ることができるといった特徴を有しており、国内発の新しいゲノム編集技術として注目されています。
ニッポンジーンは、ゲノム編集技術に必要な研究用試薬を供給することにより、わが国のゲノム編集技術の発展に貢献して参ります。

品名	Code No.	備考
Cascade-crRNA complex, EGFP	312-09611
Cascade-crRNA complex, hB2M	312-09471
Cas3 protein NLS	311-09441
Cascade-crRNA複合体作製サービス	-

CRISPR-Cas3システム

CRISPR-Cas3は、ガイドRNAにあたるcrRNAと5種類のタンパク質から構成されるCascade（カスケード）が複合体を形成し、標的DNA配列を認識して結合します。そこにCas3タンパク質が結合することでDNAを切断します。CRISPR-Cas3ではCas3タンパク質が標的配列の上流側を連続的に分解することで標的配列を大きく削ることができる性質を持ち、さらにcrRNAの相補配列が32塩基と長いため、従来のゲノム編集技術の課題であったオフターゲットへの影響も極めて低い特長があります。

特長

・　ゲノムの大規模欠損が可能 ・　オフターゲット変異のリスクが低く、特異性が高い（安全性の高いゲノム編集技術） ・　シンプルなライセンスのため、ゲノム編集技術の実用化にむけた戦略が立て易い

図1. CRISPR-Cas3による二本鎖DNAの切断
5種類のタンパク質から構成されるCascadeとcrRNAの複合体に、Cas3が結合することでDNAを切断。

表1. CRISPR-Cas3の特長（CRISPR-Cas9との比較）

CRISPR-Cas3システムを用いたゲノム編集

細胞でのゲノム編集評価（データ提供：C4U株式会社）

β2-ミクログロブリンをコードするB2M遺伝子をターゲットとして実験を行った。エレクトロポレーション法でHEK293T細胞へCas3 protein NLS（Code No.311-09441）及びCascade-crRNA複合体を導入し、培養３日後にFlow CytometoryでB2M遺伝子のノックアウトをHLA-A抗体を使って確認した。また、B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているか、クローニング及びシーケンス解析により確認した。

シーケンス解析による欠損領域の確認
B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているか、クローニングおよびシーケンス解析により確認した。