ISOHAIR EASY

毛根からのDNA抽出キット

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
ISOHAIR EASY	319-07781	100回分	15,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

本品（アイソヘアーイージー）は、毛根から簡便にDNA を抽出するための試薬です。
抽出したDNA 溶液は、精製をしないでそのまま核酸増幅法の鋳型として利用することができます。

特長

ヒトの毛根からDNA抽出が可能操作が簡便で約30分間で抽出可能

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製品内容

ISOHAIR EASY (100回分)
構成品	容量	保存	備考
ISOHAIR EASY	1,000 μl x 5本	-20°C

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使用例

検体の準備（エタノールによる毛髪の洗浄）

ISOHAIR EASYの検体例

毛髪3本（毛根付）を採取し、毛根部から1.5 cm程度にハサミ等で切断する。
※採取した毛髪に毛根があることを確認（右図）。^*1
エタノールを300 μl注いだ1.5 ml容チューブの中に、ピンセット^*2 で毛根部を3本入れる。
数回転倒混和して簡単に洗う。毛根部を取り出した後、ろ紙やキムワイプなどの上にのせてエタノールを蒸発させる。

核酸の抽出

ISOHAIR EASYを室温に置いて融解し、転倒混和で均一にした後、スピンダウンして氷上に静置する。
0.2 ml容チューブにISOHAIR EASYを50 μl注ぎ、準備した毛根部3本をチューブの中に入れる。
インキュベート
55°C、20分間インキュベート^*3
94°C、10分間インキュベート
氷上に置いて速やかに4°Cに冷却
ピペッティングして混合した後、不溶物を取らないように上清を1.5 ml容チューブに移し、DNA抽出液とする。^*4
※本品の使用で、毛髪3本から1～6.5 ng/μl のDNAが抽出されることを確認しております。^*5

*1　毛根が目視で確認できない検体や自然脱毛した検体では、十分な核酸が得られない場合があります。
*2　コンタミネーションを防ぐため、ピンセットは使用する毎にエタノールで洗浄して下さい。
*3　毛髪をISOHAIR EASY中でインキュベートした際は、見た目上ほとんど変化しませんが、実際にはDNAが溶出しています。
*4　不溶物が浮いて上清が取りにくい場合、0.2 ml容チューブの耐遠心力は低いため1.5 ml容チューブに一度全量を移してから遠心(12,000 rpm x 2 min)し、上清を分取して下さい。
*5　毛髪から得られるDNA量は、個人の髪質によって差があり、たとえ同一人物でも毛髪1本1本によって差があります。

Data 1: リアルタイムPCR法の利用

ISOHAIR EASYを用いてA、B、C 3人の毛髪各3本から調製したDNA抽出液 2 μlを鋳型にして、GeneAce SYBR™ qPCR Mix α No ROXを用いてリアルタイムPCRを行い、Gap遺伝子(GAPDH)を検出した。（装置：LightCycler^® 96）

反応液組成

2×GeneAce SYBR™qPCR Mix α No ROX	12.5 µl
Primers (5 µM each)	2.0 µl
DNA抽出液(毛根ゲノムDNA)	2.0 µl
d.d.H2O	up to 25.0 µl

反応条件

95°C	10 min.	酵素の活性化処理
95°C	30 sec.	45サイクル
60°C	1 min.	45サイクル
↓
融解曲線解析

＜結果＞

増幅曲線

検量線
	検量線コントロールとしてHuman genomic DNA(Clontech社)を使用。

Data 2: LAMP法の利用

ISOHAIR EASYを用いてA、B 2人の毛髪各3本から調製したDNA抽出液4 μlを鋳型に、等温遺伝子増幅用試薬(Isothermal Master Mix)を用いてLAMPプライマーセットで標的領域(IL28B遺伝子)の増幅を行い、その増幅産物に対して会合曲線解析を行った。（等温増幅蛍光測定装置：Genie^® II）

Isothermal Master Mix	15.0 µl
LAMP Primers	2.5 µl
DNA抽出液(毛根ゲノムDNA)	4.0 µl
d.d.H2O	up to 25.0 µl
↓
増幅	63°C、60分間
会合曲線解析	98°C-75°C、0.05°C/秒

＜結果＞

増幅曲線	会合曲線解析

注) LAMP法は、標的遺伝子に対する4種類のプライマーと鎖置換型DNA 合成酵素を用いて、一定温度(65°C付近)で反応させる遺伝子増幅法であり、高い増幅効率と特異性を特長とします。

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Q & A

ISOHAIR（Code No. 319-03401）とISOHAIR EASY（Code No. 319-07781）の違いは？

「ISOHAIR」と「ISOHAIR EASY」には下記のような違いがあります。ISOHAIR EASYは毛根から簡便にDNAを抽出できますが、必ず毛根部があるサンプルを使用する必要があります。


	ISOHAIR	ISOHAIR EASY
サンプル	・ヒト毛髪：毛根部試料は抜去した毛髪の毛根から約1cm、毛幹部試料は毛根部試料の先2～6cm。（自然脱毛した検体も可）・ヒト爪：先端を爪切りで切り取り、それをカッターで約1mm 角位に切ったもの2 個(0.5 mg)程度。・マウス体毛：一つまみ(5mg 程度)分をはさみで切り取ったもの。・マウス爪：先端から約1～2mm 程度を切り取ったもの。＊試料は新鮮なものの方が収量がよい。	・ヒトの毛根：毛根部から約1.5 cm。（毛根が目視で確認できない検体や自然脱毛した検体では、十分な核酸が得られない場合がある。）
プロトコール	・約1時間の操作	・約30分間の操作
抽出の様子	・毛髪を溶解左：一回目インキュベート（55°C, 20 分）後右：二回目インキュベート（ 55°C, 5～10 分）後　＜完全溶解＞	・毛髪をISOHAIR EASY 中でインキュベートした際は、見た目上ほとんど変化しない。（溶解していないように見えるが、実際にはDNA が溶出している）