CRISPR-Cas3システム
Cascade-crRNA複合体作製サービス
クリスパーキャス3システム カスケード クリスパーRNA複合体作製サービス
サービス内容
本サービスはCRISPR-Cas3ゲノム編集用のcrRNA（クリスパーRNA）の設計およびcrRNAとCasタンパク質の複合体(Cas complex for antiviral defence, Cascade-crRNA複合体)を作製するサービスです。
Cascadeを構成する5種のタンパク質と1種のcrRNAを共発現し、精製したCascade-crRNA複合体を納品いたします。
また、Cascadeを構成するタンパク質（Cas11, Cas7, Cas6）は、核移行シグナル（NLS）を有しています。
本サービスで作製したCascade-crRNA複合体（ガイドRNA）と、別売の切断活性をもつCas3 protein NLSを組み合わせることで、日本発の新しいゲノム編集技術「CRISPR-Cas3システム」に利用することができます。
サービスの概要
crRNA配列設計とCascade-crRNA複合体作製
- お客様から提供されたターゲット領域の配列情報をもとにC4U株式会社にてcrRNA配列を設計します。
- 株式会社ニッポンジーンよりお客様へ1遺伝子につき3箇所のcrRNA候補配列を報告します。
- お客様から指定された1種、2種または3種の配列に対して、Cascade-crRNA複合体を作製します。
- 本サービスは、 納品するCascade-crRNA複合体についてゲノム編集実験の成功を保証するものではありません。
- 配列情報提供書はこちらよりダウンロードできます。
起 源 |
遺伝子組換え大腸菌 |
|---|---|
濃 度 |
25 μg/μL Cascade-crRNA複合体 |
形 状 |
20 mM HEPES-NaOH (pH7.0), 350 mM NaCl |
| 構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
|---|---|---|---|
| Cascade-crRNA複合体 | 10 µL x 1本～出来高分 | -80°C | 250 µg (10 μL)ずつチューブに小分けし、 製造してできた分だけ出荷いたします。目安として、1配列あたり6～15本程度を見込んでおりますが、保証はいたしかねます。 |
| 基質プラスミド | 1本 | -80°C | 本サービスで作製したCascade-crRNA複合体は、PAMおよび標的配列を含むPlasmidの切断実験で活性を確認します。このin vitro試験に使用したPlasmidを同梱します。 |
| 検査報告書（PDF） | - | - | お客様のメールアドレス宛てに送付します。 |
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サービスの流れ
1. 注意事項を確認
■ 本サービスについてご不明な点がございましたら、
学術営業課までお問い合わせください。
注意事項【重要】
- Cascade-crRNA複合体作製サービスのご利用に際して、下記の注意事項をご確認ください。
2. 注文書と配列情報提供書を送付
■ 代理店・特約店リスト
（外部サイト：富士フイルム和光純薬株式会社）
■ 正式なお見積りをご要望の場合、
ご利用の
代理店を通して
お手元にお届けいたします。
- 「注文書」を代理店を通してお送りいただきます。
- 「配列情報提供書」（エクセル形式）をニッポンジーンに直接メールで送付してください。
3. 設計
納期：1～2週間（お客様による配列確認に要する時間は含みません）
- 「配列情報提供書」の内容をニッポンジーンおよびC4U株式会社にて確認します。
- C4U株式会社にて設計した1遺伝子につき3箇所のcrRNA候補配列をニッポンジーンよりお客様のメールアドレス宛に送付します。
- お客様はどの候補配列に対して作製を依頼するか、ニッポンジーンへご返信ください。
- お客様から指定された1種、2種または3種の配列に対して、Cascade-crRNA複合体の作製を開始します。
4. 作製作業
ニッポンジーンで実施する作業は以下の通りです。
■納期の目安
1配列：作製3か月
2配列：作製3か月半
3配列：作製4か月
＊本サービスで作製したCascade-crRNA複合体は、
PAMおよび標的配列を含むPlasmidの切断実験で
活性を確認しております。（実験例はこちら）
納期：3～4か月
- crRNA発現プラスミド調製
- crRNA発現プラスミド配列確認（シーケンス解析）
- Cascade-crRNA複合体を大腸菌培養（共発現）
- Cascade-crRNA複合体を精製
- 吸光度係数による濃度測定
- 小分け分注
- 基質プラスミドによるヌクレアーゼ活性確認（DNA切断試験）＊
- SDS-PAGEによる純度確認
5. 納品物送付
- 納品物（1配列につき1箱）をドライアイス梱包にて配送します。
- 検査報告書（PDF）をニッポンジーンよりお客様のメールアドレス宛に送付します。
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Q & A
- 候補領域と削りたい方向性とは何ですか？
- お客様よりご提供いただく標的遺伝子周辺の配列情報をもとに、C4U株式会社にて1遺伝子につき1～3箇所のcrRNAの候補配列（32塩基）を設計いたします。crRNAの候補配列を抽出できるよう、下図を参考にして「500 base前後の候補領域」のご入力と「標的DNAに対して削りたい方向性」をご選択ください。
削りたい方向性（PAMと切断の方向）
CRISPR-Cas3システムでは、設計したcrRNAの位置からPAM配列の方向にDNAを削ります。
crRNA配列を抽出するための候補領域
基本的にExonを狙うようにターゲットを選択します。選択したcrRNAによって活性が異なります。Cas3の特性としてPAMから約150 base先から欠損が開始されるため、標的の周辺配列から150 baseほど空けた500 base前後が候補領域として望ましいです。
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資料 Data Sheet
SDS(Safety Data Sheet)
リーフレット
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関連情報
注意事項
【重要】カスケード複合体作製サービスのご利用に際して、以下の注意事項をご確認下さい。
＜カスケード複合体の設計・作製について＞
- 本サービスは、専門のスタッフが最善を尽くして設計・作製を行いますが、ゲノム編集実験の成功を保証するものではありません。
- 標的配列にリピート配列が含まれる場合など、標的部位やその配列によっては複合体の切断活性が著しく低くなったり、作製効率に大きく影響が出る可能性があります。
＜サービスについて＞
- 本サービスは研究目的でのみ利用することができます。それ以外の目的で利用することはできません。
- 納品物のカスケード複合体は、ご注文されたお客様もしくは共同研究先（特定の第三者）が使用できます。
- 実施の際は、当社 組換えDNA安全委員会の審査が必要となります。配列情報提供書に必要事項を漏れなく記入して下さい。
- 配列情報提供書の内容や記入漏れにより、組換えDNA安全委員会の承認を得られない場合は、サービスが行えませんのでご了承下さい。
- ご依頼数が多い場合、あるいはご依頼が集中している場合は、通常の納期では終了しない場合もありますのでご了承下さい。
- お客様からお預かりした遺伝子情報や設計結果は、契約書の有無に関わらず秘密保持に万全を期し、お客様の同意があった場合、また法律等によって要求された場合を除き、弊社およびC4U株式会社以外の第三者に対して情報を提供することは一切ありません。
- お客様の個人情報は、弊社、C4U株式会社、富士フイルム和光純薬株式会社ならびに販売代理店からの事務連絡等に使用させていただく場合があります。
ライセンス
- 本品はC4U 株式会社とのライセンス契約をもとに製造、販売を行っております。
備考
- 本品は東京大学医科学研究所 先進動物ゲノム研究分野の真下知士先生、吉見一人先生、理化学研究所放射光科学研究センター（生物系ビームライン基盤グループ） の竹下浩平先生の技術支援のもとに開発されました。
- 本品は試験研究用試薬です。医薬品の用途には使用しないでください。
関連製品
問い合わせ先
- 購入に関するお問い合わせ先
- 富士フイルム和光純薬株式会社および同社代理店・特約店
- 富士フイルム和光純薬株式会社 製品検索サイト
- 製品に関するお問い合わせ先
- 株式会社ニッポンジーン 学術営業課
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