SphI

制限酵素

品名	Code No.	包装単位	価格
SphI	310-01091	300 units	9,000円
SphI	316-01093	300 units x 5	29,000円
SphI	314-01094	300 units x 10	52,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

制限酵素は、DNAの特異的な塩基配列を認識して切断するエンドヌクレアーゼです。
本品には反応バッファーが添付されており、組成は酵素反応条件の 10倍濃度です。例えば反応容量が 50 μl の場合には反応バッファーを 5 μl 加えます。

起源	Streptomyces phaeochromogenes
認識配列	5'……G　CATG▼C……3' 3'……C▲GTAC　G……5'
活性	1 – 10 units/μl
酵素反応条件	1 x H buffer, 37°C
活性の定義	1 unitは、反応混合液 50 µl中 1 µg のlambda DNAを 60分間で完全に分解する酵素活性とする。
酵素形状	100 mmol/l KCl, 10 mmol/l Tris-HCl（pH 7.5）, 0.1 mmol/l EDTA, 1 mmol/l DTT, 0.2 mg/ml BSA, 50% Glycerol

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製品内容

保存方法

-20°C

SphI （300 units）
構成品	容量	備考
SphI	300 units x 1	酵素溶液活性および酵素形状は上記参照
10 x H buffer	1 ml x 1	ラベル色：赤色 1,000 mmol/l NaCl, 500 mmol/l Tris-HCl（pH 7.9 at 25°C）, 100 mmol/l MgCl2, 10 mmol/l DTT

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使用例

本品には反応バッファーが添付されており、組成は酵素反応条件の 10倍濃度です。
例えば反応容量が 50 μl の場合には製品添付の反応バッファーを 5 μl加えます。

SphI の熱失活条件

65°C　30分間：　残存活性　5%未満

残存活性測定方法：　反応液40 μl 中で、適当な基質DNA 2 μg と、制限酵素30 units とを1 時間反応させた後、65°Cで30 分間、または70°Cで30 分間インキュベートしました。このうち20 μl のDNA 溶液に1 μg のDNA を加えて、さらに150分間反応させ、アガロースゲル電気泳動にて残存活性を調べました。
（酵素により耐熱性が異なり、DNA 変性温度を考慮すると、熱処理だけでは完全失活できない場合もあります。確実に完全失活させるためにはフェノール処理をお奨めします。）

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Q & A

ダブルダイジェスションするときの注意点はありますか？: 同時に二種類の制限酵素処理を行う際には、両方の酵素にとって至適な条件の反応バッファーを選択します。酵素に添付の反応バッファーを用いたときの酵素活性を100%とした場合の他の反応バッファーによる酵素活性についてはバッファー別相対活性一覧表（PDF　173KB）をご覧ください。
なお、制限酵素NotI にはTriton X-100が別添付されていますが、Triton X-100 が他の制限酵素反応に与える影響を確認していないため、ダブルダイジェスションの際には添加しないことをお勧めします。
酵素の組み合わせによってはダブルダイジェスションができない場合があります。その場合は別々に酵素反応を行ってください。
（重要）基質に対して大過剰の酵素を使用するとスター活性が引き起こされる可能性があります。酵素の添加量は必ず全体の液量に対して1/10量を超えないように注意してください。比較的よく知られているスター活性について一覧（PDF　389KB）にしました。