CUGA^® in vitro Transcription Kit

RNA大量合成キット

CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit

Data 1. RNA合成量の比較

短時間の反応で、野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品の約2～5倍のRNAを合成することが可能です（図1）。37℃、2時間で直鎖DNA鋳型から200 μg以上のRNAを合成できるので、長時間の反応を必要としません（図2）。

図1. RNA合成量の比較-1（1,600 base）		図2. RNA合成量の比較-2

	1 ：野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 ： CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit		CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit
			従来の製品 A
			従来の製品 B

Data 2. 鋳型の末端形状の影響

従来のin vitro RNA合成反応では、3'突出末端鋳型から異常なRNAが生じることが知られています。しかし、CUGA^® 7 in vitro Transcription Kitでは鋳型の末端形状に依存しない正確なRNA合成が行われ、従来の製品に比べ目的のRNA量も増えています。

図3. SacⅠ（3'突出）末端鋳型によるRNA合成（1,600 base）
	pBluescript SK+/Sac I 0.05 pmolから、野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来の製品とCUGA^® 7 in vitro Transcription Kit を用いてRNAを合成した。電気泳動： 1% Agarose-2.2 M ホルムアルデヒドゲルエチジウムブロマイドで染色
1 ：野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 ： CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit		目的の転写産物
		不完全な転写産物

Data 3. 鋳型配列中のターミネーター配列の影響

CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit は一部のターミネーター配列を認識しませんので、不完全なRNA を作らず、目的の RNA のみが正確に得られます。

図4. 鋳型配列中のターミネーター配列の影響
	直鎖化した鋳型DNA（下図）0.05 pmolから従来の製品とCUGA^® 7 in vitro Transcription Kitを用いてRNAを合成した。電気泳動： 1%アガロース - 2.2 M ホルムアルデヒドゲルエチジウムブロマイドで染色。
1 ：野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 ： CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit		目的の転写産物
		不完全な転写産物

*PTH signal : Bio Heらによって報告されたヒトPTH(preproparathyroid hormone) cDNA遺伝子内に存在するT7 RNA ポリメラーゼの転写反応終結活性を持つ配列。(He, B. et. al. J. Biol.Chem., 207:30 (1998))

Data 4. 正確で効率の良い標識の取り込み

野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品よりも、正確に効率良く標識を取込むことができます。

図5. Biotin標識リボプローブの電気泳動（100 base）
	（B）Biotin標識リボプローブの電気泳動写真。野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品では顕著に異常転写産物が認められるが、CUGA^® 7 in vitro Transcription Kitでは目的産物が正確に転写されている。
1 ： CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit 2 ：野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品		目的の転写産物
		異常転写産物

CUGA^® 6 in vitro Transcription Kit
CUGA^®3 in vitro Transcription Kit
CUGA^® in vitro Transcription Kit のページへ

ページトップ