品名 | Code No. | 包装単位 | 価格 | 備考 |
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Expression Vector pLEAD4 DNA, pre-digested | 315-06801 | 5.0 μg | 36,000円 | |
Expression Vector pLEAD5 DNA, pre-digested | 312-06811 | 5.0 μg | 36,000円 |
製造元 (株)ニッポンジーン
表示価格は希望納入価格 (税別) です。
pLEAD DNA は、大腸菌を宿主とする組換えタンパク質発現ベクターです。本品は転写されたmRNA から効率よく翻訳が行われるように工夫された特徴的な構造を持っており、大腸菌でのタンパク発現で活性を持つタンパク質が得られない場合やGC 含量の高い遺伝子を効率よく発現させたい場合に使用することで、状況の改善が期待できます。また、あらかじめマルチクローニングサイトを制限酵素で消化してあるので、すぐに実験を開始できます。pLEAD ベクターは発現させる遺伝子の配列によって、pLEAD4、 pLEAD5 の2 種類から選択します。
起源 | Plasmid pLEAD4 または Plasmid pLEAD5 を保持したE. coli JM109 |
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M.W. | 1.73 x 106 Da(pLEAD4:2,657 bp, pLEAD5:2,659 bp) |
形状 | 10 mmol/l Tris-HCl(pH 8.0), 1 mmol/l EDTA |
濃度 | 0.5 µg/µl |
純度 | A260/A280 ≒ 1.8 |
備考 | GenBank Accession No. AB049968(pLEAD4),AB049969( pLEAD5) |
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構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
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Expression Vector pLEAD4 DNA, pre-digested | 5.0 µg | -20°C |
構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
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Expression Vector pLEAD5 DNA, pre-digested | 5.0 µg | -20°C |
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Expression Vector pLEAD4 DNA では、発現させるタンパク質のN末端側より 2 アミノ酸目に対応するコドンの 1 塩基目が A に限定されます。
発現させるタンパク質のN末端側より2 アミノ酸目に対応するコドンの 1 塩基目が A 以外であり、A に置換できない場合には、Expression Vector pLEAD5 DNA をご使用下さい。
耐熱性DNAポリメラーゼを発現させた大腸菌を超音波破砕し、可溶性画分をSDS-PAGEにより分離した。
<発現条件> Lane 1: pLEAD5 (E.coli JM109/37℃) Lane 2: vector A (E.coli JM109/37℃、1 mM IPTG) |
Expression Vector pLEAD5 では、IPTG による強制的な発現誘導を行うことなく、従来の発現用ベクター (vector A) よりも効率良く耐熱性DNA ポリメラーゼが豊富に発現した。
上記実験例1で得た耐熱性DNAポリメラーゼを精製し、熱処理後の活性を評価した。
1: 未処理 2: 70℃・40 分間 3: 70℃・80 分間 * 未処理の場合のDNA ポリメラーゼ活性を100%とする。 |
Expression Vector pLEAD5で発現した耐熱性DNAポリメラーゼは、70℃で80分間の熱処理を施した後も活性を維持しており、従来の発現ベクター (vector A) を用いてIPTG誘導により強制発現させたタンパク質と比較して熱安定性において優れていた。
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