0.5%, 1%, 2%濃度のAgarose Sを用いて分子量マーカーを泳動し、バンド移動距離に対するAgarose濃度の影響を調べた。電気泳動条件として100Vの電圧で泳動時間はBPBがゲルの2/3に達するまで泳動を行った。サンプルは下記のマーカーを左順からレーン1として各5 μlずつ泳動した。
左順から
レーン1:OneSTEP Ladder 1 kb
レーン2:OneSTEP Ladder 500
レーン3:OneSTEP Ladder 100
レーン4:Smart Ladder
レーン5:OneSTEP Marker 1 (λ/Hind III digest)
レーン6:OneSTEP Marker 6 (λ/Sty I digest)
レーン7:OneSTEP Marker 4 (φX174/Hae III digest)
レーン8:OneSTEP Marker 5 (φX174/Hinc II digest )
0.5% Agarose S |
1% Agarose S |
2% Agarose S |
レーン | 1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
塩基対 (kbp) |
10.0 9.0 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 |
5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 |
2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 |
10.0 8.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 |
23.1 9.4 6.6 4.4 2.3 2.0 0.6 0.1 |
19.3 7.7 6.2 4.3 3.5 2.7 1.9 1.5 0.9 0.4 0.07 |
1.35 1.08 0.87 0.60 0.31 0.28 0.27 0.23 0.19 0.12 0.07 |
1.057 0.770 0.612 0.495 0.392 0.345 0.341 0.335 0.297 0.291 0.210 0.162 0.079 |
以上の結果より、バンド移動距離におけるアガロース濃度の目安は以下のようになる。
1 kbp以上のDNAを分離したい場合は1% Agarose Sを、1 kbp未満のDNAを分離したい場合は2% Agarose Sをおすすめする。0.8 %よりも低い濃度のゲルを作成したい場合は、高強度タイプのAgarose Hを使用する。2% よりも高濃度のゲルを作成したい場合は、低分子核酸分離用のAgarose 21を使用する。
Agarose S(%) | 分離範囲 |
0.5 | 700 bp ~ 25 kb |
1.0 | 250 bp ~ 12 kb |
2.0 | 100 bp ~ 3 kb |