マツ材線虫病診断キット

Bursaphelenchus xylophilus Detection Kit

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
マツ材線虫病診断キット	NE0041	24 テスト用	25,000円
マツ材線虫病診断キット	NE0043	96 テスト用	96,000円

製造元　（株）ニッポンジーン
販売サイト　ニッポンジーンECサイト

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

マツ材線虫病診断キット(24テスト用)

マツ材線虫病診断キット（96テスト用）

本キットは、LAMP法を利用してマツ材線虫病の病原体であるマツノザイセンチュウ (Bursaphelenchus xylophilus)を検出するキットです。LAMP法によりマツノザイセンチュウゲノムDNAの一部を増幅し、増幅の有無からマツノザイセンチュウの存在を判定します。

検出に必要な操作は、
①Bx抽出液 (キット添付) を用いてマツ材片からマツノザイセンチュウのDNAを抽出した後、
②DNAを検査溶液に添加して63°Cに60分間保温するのみであり、極めて簡便です。

判定にはDNA増幅の有無を蛍光発色液の発色の有無によって確認する目視判定法を採用しており、DNA増幅反応から検出までを同一反応チューブ内の完全閉鎖系で行うため、安全に短時間でマツノザイセンチュウゲノムDNAを検出することが可能です。

特長

抽出から検出までを備えたキット

DNA簡易抽出試薬を含むため、一連の操作を行うことができます。

シンプルな使用方法

DNAサンプルを検査溶液に添加して63°Cで1時間保温するだけで検査できます。

きわめて高感度な検査

微量なDNAサンプルからも正確に判定できます。

明確な判定方法

判定は蛍光の発色を採用していますので、簡単に陰性、陽性を判別できます (下図参照)。

検査環境の汚染リスクを低減

電気泳動などの操作による汚染の心配がありません。

陰性	陽性

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製品内容

マツ材線虫病診断キット（24テスト用、96テスト用）
構成品	24テスト用	96テスト用	保存
検査用チューブ	24本	24本 x 4	室温
抽出用チューブ	24本	100本	室温
Bx 検査液	410 μl	410 μl x 4	-20°C遮光
Bx 酵素液	20 μl	20 μl x 4	-20°C遮光
蛍光発色液	20 μl	20 μl x 4	-20°C遮光
Bx 陽性コントロール	25 μl	25 μl x 4	-20°C遮光
ミネラルオイル	500 μl	500 μl x 4	-20°C遮光
Bx 抽出液	10 ml x 2	10 ml x 8	-20°C遮光

輸送方法

株式会社ニッポンジーンでは、ドライアイス梱包で製品をお届けいたします。納品当日、製品を確実にお受取りいただき、到着次第できるだけ早く－20°Cフリーザーにて保存してください。

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使用例

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Q & A

マツ材片の採取方法について: 本キットでは、対象とするマツ樹木の「幹」からマツ材片を採取します。直径 15 mm の木工用ドリルを用いて、幹の太さに応じて深さ 5 cm ないし 8 cm の穴を開けると材片を採取できます。採取するマツ材片に樹皮は不要です。
マツ材片の採取位置について: 下記リンク先の資料によると、胸高部より上 (1 mほど) など高い位置から採ると陽性率が高いようです。^(文献13)
マツ成木におけるマツノザイセンチュウの樹体内分布ー病徴発症初期における効率的な検出のためにー (林野庁東北森林管理局様、外部サイトリンク)

ただし感染の初期は病徴 (枯れ) がなく、線虫は分散して低密度化している場合があるため注意が必要です。
キットを使用する場合、「一箇所だけでなく、複数箇所から材片を採ってみる」、「同じ位置から採取した材片で複数のテストをする」などの対処により取りこぼしは低減すると考えられます。
また、多くはマツノマダラカミキリが囓った摂食痕からマツノザイセンチュウが樹体内へ侵入しますが、産卵痕から侵入することもあります。そのため、マツノマダラカミキリによる産卵痕がサンプリング部位のひとつの目安になるかも知れません (産卵痕周辺への局在)^{(文献11、16)}。
検査時期について: 材片採取は地域や時期によらず、枯れていると気付いたらその時に行うことをお勧めします (葉が赤く枯れ上がっていれば、検査の対象となります)。

関東以西の暖かい地域では、夏に感染すると秋には真っ赤に枯れてしまうため、秋に採取し確定のための検査を行います。
東北地方などでは気温が低く、病徴の進行が遅いため一年中枯れが発生します。寒い地域で感染後に年を越して枯れた場合 (年越し枯れ：年明けから 5、6月ごろまでに枯れた木)、線虫は検出されにくい傾向があります (全身に線虫が蔓延・拡散せず、一部に局在したままになるため)。
インキュベーター (恒温器) の代わりに使用できる安価な保温器はありませんか？: 55˚Cや63˚Cの保温に魔法瓶 (真空断熱容器) を、94～100˚Cの保温には電気ポットや手鍋で沸騰させたお湯が使用可能です。魔法瓶には、ジャータイプなど広口の容器が扱いやすいです (400 ml 以上の熱湯を入れておくと60分間で1˚C程度しか低下しません)。