Transformation Kit

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
316-01331	Transformation Kit HB101	10回分	22,000円
319-01321	Transformation Kit JM109	10回分	22,000円
310-01731	Transformation Kit MV1184	10回分	22,000円
313-01721	Transformation Kit DH5	10回分	22,000円

製品概要

　Transformation Kit は効率良く形質転換させるためのキットで高いコンピテンシーを持った大腸菌と専用培地(Hi-Competence Broth, Code No. 319-01343)および Standard plasmid DNA 溶液から構成されている。

構成

Competent E. coli*(100 µl×10 本)
Hi-Competence Broth (1 ml×5 本)
pBR322 DNA (10 ng/ml, 100µl)

*Competent E. coliの種類はキットによって異なる。

Competent E. coliの種類とGenotype および形質転換効率
Competent E. coli	Genotypeおよび形質転換効率
HB101	Genotype leuB6, proA2, recA13, thi-1, ara-14, lacY1, galK2, xyl-5, mtl-1, rspL20, supE44, hsdS20, (rB-, mB- at least thi-hsd from Escherichia coli B) 形質転換効率 pBR322 DNA 0.1ng を用いた場合、5×107 cfu/µg pBR322 DNA以上
JM109	Genotype endA1, gyrA96, thi, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB), recA1, F'[traD36, proAB+, laclq, lacZΔM15] 形質転換効率 pBR322 DNA 0.1 ngを用いた場合、1×108 cfu/µg pBR322 DNA以上備考クローニング部位がlacZ遺伝子中にあるベクターDNAを用いて形質転換を行った際に、X-galおよびIPTGを含む培地でblue/white選択を行うことができる。
MV1184	Genotype ara, Δ(lac-proAB), rpsL, thi, (φ80 lacZΔM15), Δ(srl-recA)306::Tn10(tetr), F'[traD36, proAB+, laclq, lacZΔM15] 形質転換効率 pUC19 DNA 0.1 ngを用いた場合、1×107 cfu/µg pUC19 DNA以上備考クローニング部位がlacZ遺伝子中にあるベクターDNAを用いて形質転換を行った際に、X-galおよび IPTGを含む培地でblue/white選択を行うことができる。
DH5	Genotype supE44, hsdR17, recA1, gryA96, endA1, thi-1,relA1 形質転換効率 pBR322 DNA 0.1 ngを用いた場合、5×108 cfu/µg pBR322 DNA以上

使用法

Competent E. coli (100 µl)
↓氷中にて融解
↓←Plasmid DNA (〜0.1 ng)注1)
↓氷中にて20分間静置
↓42°Cにて45秒間熱処理(水浴使用)
↓氷中にて2分間以上静置
↓全量を400µlのHi-Competence Broth注2)またはLB Broth を含む試験管注3)に移す
↓37°Cにて1時間振とう培養または静置
↓選択培地プレートに塗布注4)
↓37°Cにて一晩静置
大腸菌のコロニー

注1)このとき加えるplasmid DNAの容量は約10 µl までにする。10 µl 以上加えてもよいが、効率が下がる場合がある。
注2)使用直前に融解し、よく振って一様にした後、competent cellの4倍量を分注してあらかじめ37°Cで保温しておく。
SOC培地*も使用できる。
*SOC培地
- 2%(w/v) Tryptone
- 0.5%(w/v) Yeast Extract
- 10 mmol/l NaCl
- 2.5 mmol/l KCl
- 10 mmol/l MgCl2
- 10 mmol/l MgSO4
- 20 mmol/l Glucose
注3)試験管は、なるべく径の大きいものを使用したほうがHi-Competence Brothの効果が高まる。
注4)必要であればHi-Competence BrothまたはLB Brothで希釈する。

使用上の注意

　Competent E. coliは一度融解すると時間の経過とともに形質転換効率が下がるため、融解後はできるだけ早くご使用ください。
　また、融解後の再凍結保存は避けて下さい。

参考

http://www.atcc.org/

文献

1)Hara, N. et al. : Nucleic Acids Res., 16, 8727(1988)
2)Hanahan, D. : J. Mol. Biol., 166, 557(1983)

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