GM quicker 2
～GMO DNA Extraction Kit for Rice, Rapa seed and Potato～

GM quicker 2 は、厚生労働省 「平成18年9月15日付け食安輸発第0915002号」において、
遺伝子組換え米（LLRICE601）の検査法（DNA抽出精製）に採用されました。

GM quicker 2 は、厚生労働省 「平成19年1月26日付け食安監発第0126005-8号」における
「安全性未審査の中国米加工品の検知法」に採用されました。

コメ、ナタネ、ジャガイモからの高純度ゲノミックDNA抽出キット!

　GM quicker 2は、コメを始めとする穀物からDNAを抽出するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でDNAがシリカへ吸着する原理（Boom Technology）を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物（Genetically Modified Organisms：GMO）の検査においては、DNAを用いた方法が広く普及していますが、これまでの植物DNA抽出キットは抽出対象を「葉」としていたため、穀物からのDNA抽出には必ずしも効率的ではありませんでした。

　本キットでは、抽出対象を穀粒へ特化させることによって、約 40分間という短い時間で高い精製度のDNAを抽出することができます。また、本キットはα-アミラーゼを使用する事により、うるち米のみならずもち米にも対応した設計となっており、コメ未知試料の検査において対応が可能です。さらに、コメ及びナタネに関しては、1粒検査のためのDNA抽出にも対応可能です。使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカゲル膜は、充分なDNA吸着容量と高い溶出効率を確保しています。

　本キットによって抽出された DNAは、PCRや制限酵素反応に適用することができます。

　　・コメ、ナタネ、ジャガイモから約40分で高精製度のDNAを抽出することができる
　　・抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しない
　　・試料のクロスコンタミネーション防止に配慮したキット設計を行っている
　　・抽出したDNAはPCRや制限酵素反応にそのまま使用することができる

構成品名	容量	保存
GE1 Buffer	40 ml × 1本	室温保存（15～25℃）
GE2-K Buffer	5 ml × 1本	室温保存（15～25℃)
GB3 Buffer	12.5 ml × 1本	室温保存（15～25℃)
GW Buffer	40 ml × 1本	室温保存（15～25℃)
TE（pH8.0）	10 ml × 1本	室温保存（15～25℃)
Proteinase K	1 ml × 1本	冷凍保存（-20℃）
α-Amylase(高濃度品)	0.1 ml × 1本	冷凍保存（-20℃）
RNase A(100mg/ml)	0.5 ml × 1本	室温保存（15～25℃）
Spin Column	50 個	冷蔵保存（2～10℃）
マニュアル	1部	-

RNase A は室温保存が可能ですが、長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存（2～8℃）をお奨めいたします。

GW Buffer にはエタノールが含まれていますので、ご使用号は蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めてください。

構成品のSpin Columnは冷蔵保存（2～10℃）した方が高いDNA収量を維持することが可能です。キットに含まれる「Spin Column」の保存条件を、室温保存（15～25℃）から冷蔵保存（2～10℃）へ 変更致します。（2007.12.3）

使用法１：コメからのDNA抽出プロトコール

コメをフードミル等で粉砕し、コメ粉末試料を調製する。 2.0ml チューブに 0.5gのコメ粉末試料を秤量し、700µl のGE1 Buffer、20µlのProteinase K、2µlのα-Amylase および10µl の RNase A をそれぞれ添加し、ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。 15分間、60℃で加温する。 85µl の GE2-K Buffer を添加し、ボルテックスミキサーにてよく混和する。 遠心（≧13K×g, 5分間, 室温）する。 上清 400µlを新しい 1.5ml チューブに移す。 150µl の GB3 Buffer を添加後、150µl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。 7の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（13K×g, 30秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 650µl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 Spin Columnを新しい 1.5 ml チューブに移す。 50µlの TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する 遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液を回収する。

使用法２：コメ１粒からの DNA抽出プロトコール

コメ種子１粒をアルミホイル等で包み、金槌等で粉砕し、コメ粉末試料を調製する。 1.5 ml チューブにコメ粉末試料を添加し、250µl のGE1 Buffer、10µlのProteinase K、2µlのα-Amylase および5µl の RNase A をそれぞれ添加し、ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。 15分間、60℃で加温する。 40µl の GE2-K Buffer を添加し、ボルテックスミキサーにてよく混和する。 遠心（≧13K×g, 5分間, 室温）する。 上清 200µlを新しい 1.5ml チューブに移す。 75µl の GB3 Buffer を添加後、75µl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。 7の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（13K×g, 30秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 650µl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 Spin Columnを新しい 1.5 ml チューブに移す。 50µlの TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する 遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液を回収する。

使用法３：ナタネからのDNA抽出プロトコール

ナタネ種子をフードミル等で粉砕し、ナタネ粉末試料を調製する。 2.0ml チューブで 0.2gのナタネ粉末試料を秤量し、800µl のGE1 Buffer、20µlのProteinase K、10µl の RNase A をそれぞれ添加し、ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。 15分間、65℃で加温する。 100µl の GE2-K Buffer を添加し、ボルテックスミキサーにてよく混和する。 遠心（≧13K×g, 5分間, 室温）する。 上清 350µlを新しい 1.5ml チューブに移す。 130µl の GB3 Buffer を添加後、130µl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。 7の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（13K×g, 30秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 650µl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 Spin Columnを新しい 1.5 ml チューブに移す。 50µlの TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する 遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液を回収する。

使用法４：ナタネ1粒からのDNA抽出プロトコール

1.5ml チューブにナタネ種子1粒を入れ、ペッスルでよく破砕する。 250µl のGE1 Buffer、10µlのProteinase K、5µl の RNase A をそれぞれ添加し、ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。 15分間、65℃で加温する。 40µl の GE2-K Buffer を添加し、ボルテックスミキサーにてよく混和する。 遠心（≧13K×g, 5分間, 室温）する。 上清 200µl を新しい 1.5ml チューブに移す。 75 µl の GB3 Buffer を添加後、75µl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。 7の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（13K×g, 30秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 650µl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 Spin Columnを新しい 1.5 ml チューブに移す。 50µlの TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する 遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液を回収する。

使用法５：生ジャガイモからのDNA抽出プロトコール

生ジャガイモを約3mm角のサイコロ状にナイフで細かく切断する。 1.5ml チューブで 0.3gの生ジャガイモ粉末試料を秤量し、500µl のGE1 Buffer、4µl の RNase A をそれぞれ添加してペッスルでよく破砕後、ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。 85µl の GE2-K Buffer を添加し、ボルテックスミキサーにてよく混和する。 遠心（≧13K×g, 5分間, 室温）する。 上清 400µl を新しい 1.5ml チューブに移す。 150µl の GB3 Buffer を添加後、150µl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。 6の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（13K×g, 30秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 650µl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液は廃棄する。 Spin Columnを新しい 1.5 ml チューブに移す。 50µlの TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する 遠心（13K×g, 60秒間, 室温）し、濾液を回収する。

1. コメ種子1粒からのDNA 抽出
	本キットを用いてコメ種子1粒からDNA 抽出を行った。いずれの種子からもDNA を抽出することができた。 本キットで抽出したDNA 50µl のうちの20µl 量を 1% Agarose S で電気泳動した。
	[電気泳動写真]	1 2 3 4 5	Lane 1, 5 ：OneSTEP Marker 6(λ/ StyⅠ digest) Lane 2 ：コシヒカリ玄米 genomic DNA Lane 3 ：コシヒカリ精米 genomic DNA Lane 4 ：コシヒカリ米飯 genomic DNA
2. コメ種子1粒から抽出したDNAのPCR
	本キットを用いて抽出した、コメ（コシヒカリ）種子１粒からの DNAサンプル0.1µl を鋳型とし、コシヒカリ特異的な領域をPCRにて増幅した。 PCR産物の一部 (10µl) を 2% Agarose S ゲルで電気泳動した。
	[電気泳動写真]	1 2 3 4 5 6	Lane 1, 6 ：OneSTEP Marker 4(φX174/Hae III digest) Lane 2 ：コシヒカリ玄米 genomic DNA を鋳型に増幅 Lane 3 ：コシヒカリ精米 genomic DNA を鋳型に増幅 Lane 4 ：コシヒカリ米飯 genomic DNA を鋳型に増幅 Lane 5 ：no template control
3. コメ種子からのDNA抽出と制限酵素消化
	本キットで各種コメ種子から抽出したDNA を制限酵素EcoRⅠで消化した。
	[電気泳動写真]	1 2 3 4 5 6 7 8	Lane 1, 8：OneSTEP Marker6 (λ/ Sty I digest) Lane 2 ：コシヒカリ genomic DNA intact Lane 3 ：コシヒカリ genomic DNA digest / EcoR I Lane 4 ：タイ米 genomic DNA intact Lane 5 ：タイ米 genomic DNA / EcoR I Lane 6 ：もち米 genomic DNA intact Lane 7 ：もち米 genomic DNA / EcoR I

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　　GM quicker 2(第1.1版)

関連製品

製品名	Code No.	包装単位	希望納入価格
GE1 Buffer	314-06371	500ml	12,000円
GE2-K Buffer	318-06651	100ml	8,000円
GB3 Buffer	315-06661	25ml	8,000円
GW Buffer	311-06641	80ml	8,000円
RNase A	318-06391	2.5ml	19,600円
GM quicker 2 Enzyme Set 　(Proteinase K, α-Amylase)	312-06671	Proteinase K：2ml　 　 α-Amylase：0.2ml	20,000円

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