| Code No. | 製品名 | 包装単位 | 希望納入価格 |
|---|---|---|---|
| 317-06361 | GM quicker | 50回用 |
36,000円 |
GM quickerは、トウモロコシやダイズなどの穀粒からDNAを抽出するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でDNAがシリカへ吸着する原理（Boom Technology）を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物（Genetically Modified Organisms：GMO）の検査においては、DNAを用いた方法が広く普及していますが、これまでの植物DNA抽出キットは抽出対象を「葉」としていたため、トウモロコシやダイズなどの穀粒からのDNA抽出には必ずしも効率的ではありませんでした。
本キットでは、抽出対象を穀粒へ特化させることによって、約45分間という短い時間で高い精製度のDNAを抽出することができます。また、本キットは検査用試料の調製におけるクロスコンタミネーションなど、抽出操作上の問題に配慮した設計となっています。さらに、本キットで使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカゲル膜は、充分なDNA吸着容量と高い溶出効率を確保しています。
・穀粒から約45分で高精製度のDNAを抽出することができる
・抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しない
・試料のクロスコンタミネーション防止に配慮したキット設計を行っている
・抽出したDNAはPCRや制限酵素反応にそのまま使用することができる
GE1 Buffer 室温保存（15～25℃） GE2 Buffer 室温保存（15～25℃） GB3 Buffer 室温保存（15～25℃） GW Buffer 室温保存（15～25℃） TE（pH8.0） 室温保存（15～25℃） RNase A(100mg/ml) 室温保存（15～25℃） Spin Column 冷蔵保存（2～10℃） マニュアル 簡易マニュアル
- RNase A は室温保存が可能ですが、長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存（2～8℃）をお奨めいたします。
- GW Buffer にはエタノールが含まれていますので、ご使用号は蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めてください。
- 構成品のSpin Columnは冷蔵保存（2～10℃）した方が高いDNA収量を維持することが可能です。キットに含まれる「Spin Column」の保存条件を、室温保存（15～25℃）から冷蔵保存（2～10℃）へ 変更致します。（2007.12.3）
使用法１：トウモロコシからのDNA抽出
- トウモロコシ種子をフードミル等で粉砕し、トウモロコシ粉末試料を調製する。
- 50 ml チューブで1.0 g のトウモロコシ粉末試料を秤量し、6 ml のGE1 Buffer および20 µl のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30 秒間攪拌する。
- 10分間室温で静置する。
- 750 µl のGE2 Buffer を添加し、10～12回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10 分間氷冷する。
- 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。
- 上清4 ml 程度を新しい50 ml チューブに移す。
- 7で回収した上清から400 µl を1.5 ml マイクロチューブに移し，残った上清は4℃で保存する。
- 50 µl のGB3 Buffer を添加する。
- 200 µl のエタノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10の混合液をSpin Column に全量移し、遠心（13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- 600 µl のGW Buffer をSpin Column に添加した後、遠心（13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- Spin Column を新しい1.5 ml マイクロチューブに移す。
- 50 µl のTE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する。
- 遠心（13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。
使用法２：ダイズからのDNA抽出
- ダイズ種子をフードミル等で粉砕し、ダイズ粉末試料を調製する。
- 50 ml チューブで1.0 g のダイズ粉末試料を秤量し、12 ml のGE1 Buffer および40 µl のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30 秒間攪拌する。
- 10 分間室温で静置する。
- 1.5 ml のGE2 Buffer を添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10 分間氷冷する。
- 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。
- 上清8 ml 程度を新しい50 ml チューブに移す。
- 7で回収した上清から700 µl を2.0 ml マイクロチューブに移し，残った上清は4℃で保存する。
- 250 µl のGB3 Buffer を添加する。
- 250 µl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10で得られた600 µl の混合液をSpin Column に移し、遠心（13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- 10で得られた残りの混合液全量を11のSpin Column に移し、遠心（13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- Spin Column に600 µl のGW Buffer を添加した後、遠心（13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- Spin Column を新しい1.5 ml マイクロチューブに移す。
1. トウモロコシおよびダイズ種子からのDNA 抽出 本キットを用いてトウモロコシおよびダイズの種子からDNA 抽出を行った。
いずれの種子からもDNA を抽出することができた。本キットで抽出したDNA の1/25 量を1% Agarose S で電気泳動した。[電気泳動写真]
4 5 6 7 8 Lane 1, 8 ：OneSTEP Marker 6(λ/ StyⅠ digest)
Lane 2～4 ：トウモロコシgenomic DNA
Lane 5～7 ：ダイズgenomic DNA2. トウモロコシおよびダイズ種子から抽出したDNA の制限酵素消化 本キットで抽出したDNA を制限酵素EcoRⅠ およびHindⅢ で消化した。 [電気泳動写真]
4 5 6 7 8 Lane 1、 8：OneSTEP Marker6 (λ/ Sty I digest)
Lane 2 ：トウモロコシgenomic DNA intact
Lane 3 ：トウモロコシgenomic DNA digest / EcoR I
Lane 4 ：トウモロコシgenomic DNA digest / HindIII
Lane 5 ：ダイズgenomic DNA intact
Lane 6 ：ダイズgenomic DNA / EcoR I
Lane 7 ：ダイズgenomic DNA / Hind III3. PCR による内在性遺伝子の検出 トウモロコシおよびダイズの内在性遺伝子検出用プライマーを用いて、本キットで抽出したDNA のPCR を行った。
PCR 条件は、農林水産省「組換え食品検査・分析マニュアル」に従った。[電気泳動写真]
4 5 6 7 8 Lane 1, 8 ：OneSTEP Marker 11(pUC19/MspⅠdigest)
Lane 2～4 ：トウモロコシgenomic DNA を鋳型にSSIIb 遺伝子を増幅(151 bp)
Lane 5～7 ：ダイズgenomic DNA を鋳型にLe1 遺伝子を増幅(118 bp)
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製品名 Code No. 包装単位 希望納入価格 GE1 Buffer GE2 Buffer RNase A
