TA-Blunt Ligation Kit

 

　本品は、TベクターへのPCR産物のライゲーション（TAクローニング）、平滑末端DNAのライゲーション専用のライゲーションキットです。従来のライゲーションキットと比較して、TベクターへのPCR産物のライゲーション（TAクローニング）、平滑末端DNAのライゲーションを高効率に行うことができます。

高効率なTベクターへのPCR産物のライゲーション（TAクローニング）、平滑末端ライゲーションを16°C（または室温）、30分の迅速反応で実現！

●これまで効率が悪いとされてきたライゲーションを高効率に！

TベクターへのPCR産物のライゲーション（TAクローニング）、平滑末端DNAのライゲーションが高効率に行えます。

●実験操作が簡単な非凍結タイプ！

-20°Cで凍結しないため冷凍庫から取り出してすぐに使用できます。

●実験操作が簡単な室温反応可能タイプ！

16°Cまたは室温でのライゲーションが可能です。

●反応終了液をそのまま形質転換に使用可能

形質転換効率の高い反応液組成ですので、フェノール/クロロホルム処理等は必要ありません。

●迅速反応

30分間で高効率ライゲーション反応を行うことができます。

	5回分	50回分
5×Ligation Mix	20µl×1	100µl×2
10×Enhancer Solution	10µl×1	50µl×2

(使用回数は20µlの反応系で使用した場合の回数となります。)

保存 : -20°C

製品マニュアルをご覧になる際にはAdobe Acrobat® ReaderまたはAdobe Acrobat® Reader Plug-inが必要です。

　 第１版(2005年11月17日)

インサートDNA		合計　 14µl
ベクターDNA
ddH2OまたはTE
10×Enhancer Solution		2µl
5×Ligation Mix		4µl
反応液量		20µl

　　↓
16°Cまたは室温で30分間反応後、そのまま形質転換
(in vitro Packagingも可能)

●TベクターへのPCR産物のライゲーション（TAクローニング）での性能比較

TベクターへのPCR産物のライゲーション（TAクローニング）において、白コロニー率（ライゲーション効率）およびコロニー数（ライゲーション効率、形質転換効率）を様々なライゲーションキットと比較した。
方法 ベクター：pGEM-T Easy（Promega）を使用した。 インサートDNA：PCR産物（500bp）を使用した。 反応条件：16°Cで30分間反応させた（TA-Blunt Ligation Kit）。 他のライゲーションキット：各製品のマニュアルに従って反応を行った。
結果 本品では他のライゲーションキットと比較して優位なコロニー数の増加、白コロニー率の上昇が認められた。

●平滑末端ライゲーションでの性能比較

一般的にライゲーション効率が悪いとされる平滑末端ライゲーション反応において、白コロニー率(ライゲーション効率)、コロニー数(ライゲーション効率および形質転換効率)を様々なライゲーションキットと比較した。
方法 ベクターDNA：pBluescript II SK(+)/EcoR Vを使用した。 インサートDNA：EcoR V断片（平滑末端、3kbp）を使用した。 反応条件：16°Cで30分間反応させた（TA-Blunt Ligation Kit）。 他のライゲーションキット：各製品のマニュアルに従って反応を行った。
結果 本品では他のライゲーションキットと比較して優位なコロニー数の増加、白コロニー率の上昇が認められた。

実験のポイント

・本キットで高効率ライゲーションを行うためには、ベクターDNA量と10×Enhancer Solutionの割合は非常に重要です。20 µlの反応には0.025pmoleのベクターDNAを使用して下さい。3kbpのベクターサイズの場合は約50ngが0.025pmoleとなります。

・効率的なライゲーションを行うためには適切なインサート : ベクターモル比で実験を行うことが重要となります。下記ページにニッポンジーン社内にて検討を行った結果を掲載しております。
>>>TA-Blunt Ligation Kit参考資料「ベクター:インサートモル比の検討」

・効率的なライゲーションを行うために、下記の「TA-Blunt Ligation Kit Q&A」をご参考下さい。
>>>TA-Blunt Ligation Kit Q&A

「新迅速クローニングのすすめ」 リーフレット (No.174) (A3サイズ）

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