CUGA® 7 and 3 in vitro Transcription Kit(ニッポンジーンテク開発製品)

＊本製品は日本国内でのみ有効です。
＊試験研究用試薬です。
　医薬品の用途には使用できません。

製品概要

　CUGA® 7および3 in vitro Transcription Kitは独自に開発した改良型RNA Polymeraseを用いることにより、目的のRNA産物を大量かつ正確に合成できるin vitro RNA合成キットです。大量のRNAを必要とするリボプローブの作成や、正確なRNAの合成を必要とするRNA構造解析等の実験に特に有用です。

　この製品は株式会社ニッポンジーンテクで開発・製造を行い、株式会社ニッポンジーンが販売を担当しています。
株式会社ニッポンジーンテクホームページ

キット内容

• CUGA® 7または3 Enzyme Solution
• 5×Reaction Buffer
• Enzyme Dilution Buffer
• 100mM CTP
• 100mM UTP
• 100mM GTP
• 100mM ATP
• Control DNA
• 0.1 mol/l DTT
• DNase Enzyme Solution
• 10 mol/l Ammonium Acetate

保存

• -20°Cで保存して下さい。
• 過冷却は避けて下さい。

特長

1. RNAの大量合成が可能
2. 正確な長鎖・短鎖RNAを合成
3. 鋳型の末端形状に依存しない
4. 鋳型配列に依存しない伸長反応
5. 正確で効率の良い標識の取込み

特長 1 : RNAの大量合成が可能

　短時間の反応で、野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品の約2〜5倍のRNAを合成することが可能です(図1)。37°C、2時間で直鎖DNA鋳型から200µg以上のRNAを合成できるので、長時間の反応を必要としません(図2)。
また、1µgのRNAを合成するための費用は約5円で、非常にお得です。

図1 : 合成量の比較-1

1 : 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 : CUGA® 7 in vitro Transcription Kit

図2 : 合成量の比較-2

	CUGA® 7 in vitro Transcription Kit
	従来の製品 A
	従来の製品 B

特長 2 : 正確な長鎖・短鎖RNAを合成

　長鎖RNAも短鎖RNAも、同じキットで合成できます。非特異的に3'末端が伸長した異常転写産物の生成量は、野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品と比べて、大変少なくなっています。

図3 : 鋳型の長さと異常転写産物

A 長い鋳型(2.0 kb) B 短い鋳型(16 b)* 異常転写産物 *東京大学医科学研究所/遺伝子動態分野/中村研究室/坂本泰一先生提供 1 : CUGA® 7 in vitro Transcription Kit 2 : 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品

特長 3 : 鋳型の末端形状に依存しない

　従来のin vitro RNA合成反応では、3'突出末端鋳型から異常なRNAが生じることが知られています。しかし、CUGA® 7 in vitro Transcription Kitでは鋳型の末端形状に依存しない正確なRNA合成が行われ、従来の製品に比べ目的のRNA量も増えています。

図4 : 鋳型の末端形状の影響

pBluescript SK+/Sac I 0.05pmolから、野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来の製品とCUGA® 7 in vitro Transcription Kitを用いてRNAを合成し、1%アガロース - 2.2Mホルムアルデヒドゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色。 1 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 CUGA® 7 in vitro Transcription Kit 目的の転写産物 不完全な転写産物

特長 4 : 鋳型配列に依存しない伸長反応

　CUGA®7 in vitro Transcription Kit は一部のターミネーター配列を認識しませんので、不完全な RNA を作らず、目的の RNA のみが正確に得られます。

図5 : 鋳型配列中のターミネーター配列の影響

	直鎖化した鋳型DNA(下図) 0.05 pmolから従来の製品とCUGA® 7 in vitro Transcription Kitを用いてRNAを合成し、1%アガロース - 2.2Mホルムアルデヒドゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色。 1 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 CUGA® 7 in vitro Transcription Kit 目的の転写産物 不完全な転写産物
図 : ターミネーター配列を持つ鋳型DNA *PTH signal : Bio Heらによって報告されたヒトPTH(preproparathyroid hormone) cDNA遺伝子内に存在するT7 RNA ポリメラーゼの転写反応終結活性を持つ配列。(He, B. et. al. J. Biol.Chem., 207:30 (1998))

特長 5 : 正確で効率の良い標識の取込み

　野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品よりも、正確に効率良く標識を取込むことができます。

図6 : 正確で効率の良い標識の取込み

(A) Cy3™標識したリボプローブの作製におけるCy3™の蛍光強度の比較。従来品に比べてCy3™-UTPの取込み効率が良好である。 (B) Biotin標識リボプローブの電気泳動写真。野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品では顕著に異常転写産物()が認められるが、CUGA® 7 in vitro Transcription Kitでは目的産物()が正確に転写されている。 1 CUGA® 7 in vitro Transcription Kit 2 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品

マニュアル

　製品のマニュアルは下記ページよりダウンロードできます。
[ニッポンジーンテク 製品関連ライブラリ]

参考文献

1. John F. Milligan and Olke C. Uhlenbeck. Methods in Enzymology., 180 : 51-62 (1989)
2. He, B. et al., J. Biol.Chem., 207 : 30 (1989)
3. Molecular Cloning A LABORATORY MANUAL THIRD EDITION

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