CUGA^® in vitro Transcription Kit シリーズ

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
307-13531	CUGA® 7 in vitro Transcription Kit	20反応	30,000円
304-14641		5反応	9,000円
309-88223	CUGA® 6 in vitro Transcription Kit	20反応	30,000円
303-88221		5反応	9,000円
307-15493	CUGA® 3 in vitro Transcription Kit	20反応	30,000円
301-15491		5反応	9,000円

＊本製品は日本国内でのみ有効です。
＊試験研究用試薬です。 医薬品の用途には使用できません。

　CUGA^® in vitro Transcription Kitシリーズは独自に開発した改良型RNA Polymeraseを用いることにより、目的のRNA産物を大量かつ正確に合成できるin vitro RNA合成キットです。大量のRNAを必要とするリボプローブの作成や、正確なRNAの合成を必要とするRNA構造解析等の実験に特に有用です。

　この製品は株式会社ニッポンジーンテクで開発・製造を行い、株式会社ニッポンジーンが販売を担当しています。
株式会社ニッポンジーンテクホームページ

• CUGA^® Enzyme Solution
• 5×Transcription Buffer
• Enzyme Dilution Buffer
• 100mM CTP
• 100mM UTP
• 100mM GTP
• 100mM ATP
• Control DNA
• 0.1M DTT
• DNase Enzyme Solution
• 10M Ammonium Acetate
• ユーザーズマニュアル
  
  • -20°Cで保存して下さい。
  • 過冷却は避けて下さい。

1. RNAの大量合成が可能
2. 鋳型の末端形状に依存しない
3. 鋳型配列に依存しない伸長反応
4. 正確で効率の良い標識の取込み

特長 1 : RNAの大量合成が可能

　短時間の反応で、野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品の約2〜5倍のRNAを合成することが可能です(図1)。37°C、2時間で直鎖DNA鋳型から200µg以上のRNAを合成できるので、長時間の反応を必要としません(図2)。
また、1µgのRNAを合成するための費用は約5円で、非常にお得です。

図1 : 合成量の比較-1 1 : 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 : CUGA® 7 in vitro Transcription Kit

図2 : 合成量の比較-2 CUGA® 7 in vitro Transcription Kit 従来の製品 A 従来の製品 B

特長 2 : 鋳型の末端形状に依存しない

　従来のin vitro RNA合成反応では、3'突出末端鋳型から異常なRNAが生じることが知られています。しかし、CUGA^® 7 in vitro Transcription Kitでは鋳型の末端形状に依存しない正確なRNA合成が行われ、従来の製品に比べ目的のRNA量も増えています。

図4 : 鋳型の末端形状の影響

pBluescript SK+/Sac I 0.05pmolから、野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来の製品とCUGA® 7 in vitro Transcription Kitを用いてRNAを合成し、1%アガロース - 2.2Mホルムアルデヒドゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色。 1 ： 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 ： CUGA® 7 in vitro Transcription Kit ： 目的の転写産物 ： 不完全な転写産物

 

特長 3 : 鋳型配列に依存しない伸長反応

　CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit は一部のターミネーター配列を認識しませんので、不完全な RNA を作らず、目的の RNA のみが正確に得られます。

図5 : 鋳型配列中のターミネーター配列の影響

	直鎖化した鋳型DNA(下図) 0.05 pmolから従来の製品とCUGA® 7 in vitro Transcription Kitを用いてRNAを合成し、1%アガロース - 2.2Mホルムアルデヒドゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色。 1 ： 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品 2 ： CUGA® 7 in vitro Transcription Kit ： 目的の転写産物 ： 不完全な転写産物
図 : ターミネーター配列を持つ鋳型DNA *PTH signal : Bio Heらによって報告されたヒトPTH(preproparathyroid hormone) cDNA遺伝子内に存在するT7 RNA ポリメラーゼの転写反応終結活性を持つ配列。(He, B. et. al. J. Biol.Chem., 207:30 (1998))

 

特長 4 : 正確で効率の良い標識の取込み

　野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品よりも、正確に効率良く標識を取込むことができます。

図6 : 正確で効率の良い標識の取込み

(B) Biotin標識リボプローブの電気泳動写真。野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品では顕著に異常転写産物()が認められるが、CUGA® 7 in vitro Transcription Kitでは目的産物()が正確に転写されている。 1 ： CUGA® 7 in vitro Transcription Kit 2 ： 野生型T7 RNA Polymeraseを用いた従来品

マニュアル

CUGA^® 3 /CUGA^® 6 /CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit　ユーザーズマニュアル Ver.4.0

その他

CUGA^® 6 in vitro Transcription Kitを使用した実験データ

参考文献

1. John F. Milligan and Olke C. Uhlenbeck. Methods in Enzymology., 180 : 51-62 (1989)
2. He, B. et al., J. Biol.Chem., 207 : 30 (1989)
3. Molecular Cloning A LABORATORY MANUAL THIRD EDITION

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