pLEADベクターは、大腸菌を宿主とし、プロモーターから転写されたmRNAを効率よく翻訳する為に、特に工夫された特徴的な構造を持つ「組換えタンパク質発現ベクター」です。
pLEADベクターは、効率の良いタンパク質発現を確保するために、目的遺伝子により 2 種類のpLEADベクター（pLEAD4, pLEAD5）を 準備しています。

Expression Vector pLEAD DNA, pre-digested とクローニングに必要な試薬がセットになった　pLEAD Expression Kit もご用意しております。

● 効率の良い翻訳を行うために、第１ORFの終止コドンと第２ORFの開始コドンをオーバーラップさせた特徴的な構造を採用。

● プロモーターには転写効率の良い tac プロモーターを選択。

● 融合タンパク質としてではなく、直接発現可能。

● 目的遺伝子のクローニングに用いる制限酵素であらかじめ切断してあるので、簡便に実験が行える。

こんな場合にオススメです	大腸菌での発現で、活性を持つタンパク質が得られない。
	GC含量の高いコーディング領域を持つ遺伝子を、効率よく発現させたい。

Expression Vector pLEAD DNA, pre-digested
	Expression Vector pLEAD DNA, pre-digested (0.5µg/µl)　 　5.0 µg
	・-20℃保存品
pLEAD Expression Kit
	Expression Vector pLEAD DNA, pre-digested (0.1µg/µl)　 　3.0 µg　 　2×Ligation Mix 　100µl　 　Competent E.coli JM109 　100µl×20本　 　SOC medium 　1.0ml×20本
	・20 回用 ・-20℃/-80℃保存品 （出荷時：-80℃ ドライアイス梱包）

【構造模式図】

 

【ベクターの選択】

Expression Vector pLEAD4 DNA では、発現させるタンパク質のN末端側より 2 アミノ酸目に対応するコドンの 1 塩基目が A に限定されます。
発現させるタンパク質のN末端側より2 アミノ酸目に対応するコドンの 1 塩基目が A 以外であり、A に置換できない場合には、Expression Vector pLEAD5 DNA をご使用下さい。

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【実験例1】　pLEAD によるタンパク質発現

　耐熱性 DNA ポリメラーゼを発現し、SDS-PAGE により分離した。

		＜発現条件＞ 1: pLEAD5 （E.coli JM109 / 37℃） 2: vector A （E.coli JM109 / 37℃、1mM IPTG） 大腸菌を超音波破砕し、可溶性画分を SDS-PAGE により分離した。
結果　　pLEAD5 では、従来の発現ベクター (vector A) よりも効率良く耐熱性 DNA ポリメラーゼが発現した。

【実験例2】　pLEAD で発現したタンパク質の熱安定性試験

実験例1で得た耐熱性 DNA ポリメラーゼを精製し、熱処理後の活性を評価した。

1: 未処理 　　2: 70℃・40分間 　　3: 70℃・80分間 　　＊ 未処理の場合の DNA ポリメラーゼ活性を 100 % とする。
結果　　pLEAD5 で発現した耐熱性 DNA ポリメラーゼは、70℃ で 80 分間の熱処理を施した後も活性を維持しており、従来の発現ベクター (vector A) を用いて IPTG 誘導により強制発現させたタンパク質と比較して熱安定性において優れていた。

・Ishida, M. and Oshima, T. (1994) Overexpression of genes of an extreme thermophile Thermus thermophilus, in Escherichia coli cells. J. Bacteriol. 176, 2767-2770

・Ishida, M. and Oshima, T. (2002) Effective Structure of a Leader Open Reading Frame for Enhancing the Expression of GC-Rich Genes. J. Biochem. 132, 63-70

・Ishida, M., Oshima, T. and Yutani. K. (2002) Overexpression in Escherichia coli of the AT-rich trpA and trpB genes from the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus furiosus. FEMS Microbiol. Lett. 216, 179-183

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pLEAD マニュアル(第一版) 2008.1.9

pLEAD リーフレット（こちらから PDF ファイルをダウンロードできます。）

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製品名		Code No.	包装単位	希望納入価格
Ligation-Convenience Kit		315-05963	10回用	3,200円
		319-05961	100回用	20,000円
Competent E.coli JM109		316-01353	100µl×10本	18,000円
制限酵素＆修飾酵素 まとめてお得なセット	Combination 5	007-04035	1セット（5本)	29,000円
	Combination 10	005-04036	1セット（10本)	52,000円

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