品名 | Code No. | 包装単位 | 価格 | 備考 |
---|---|---|---|---|
2 x M13 Primer Mix | 312-07651 | 96回用 | 8,000円 | 2023年5月31日販売終了 |
製造元 (株)ニッポンジーン
表示価格は希望納入価格 (税別) です。
本品は、Gene RED PCR Mix Plus と組み合わせて使用することで、迅速かつ簡単にM13 プライマーを使用するコロニーPCRを行うことができる製品です。
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包装単位は50 µl反応系での使用回数です。
-20°C
凍結融解により反応性が低下する恐れがありますので、融解後はチューブに小分けし、-20°Cでの保存をお勧めします。
構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
---|---|---|---|
2 x M13 Primer Mix | 1.2 ml x 2 |
-20°C |
組成:0.8 pmol/μl M13 forward primer, 0.8 pmol/μl M13 reverse primer, 0.1 mM Tris-HCl(pH7.5) |
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M13 forward primer |
GTTTTCCCAGTCACGACGTT |
M13 reverse primer |
GGAAACAGCTATGACCATGA |
M13 forward primer |
||
5' AAGTTGGGTA ACGCCAGGGT TTTCCCAGTC ACGACGTTGT AAAACGACGG CCAGTGCCAA 3' TTCAACCCAT TGCGGTCCCA AAAGGGTCAG TGCTGCAACA TTTTGCTGCG GGTCACGGTT |
||
5' GCTTGCATGC CTGCAGGTCG ACTCTAGAGG ATCCCCGGGT ACCGAGCTCG AATTCGTAAT 3' CGAACGTACG GACGTCCAGC TGAGATCTCC TAGGGGCCCA TGGCTCGAGC TTAAGCATTA |
||
5' CATGGTCATA GCTGTTTCCT GTGTGAAATT GTTATCCGCT CACAATTCCA CACAACATAC 3' GTACCAGTAT CGACAAAGGA CACACTTTAA CAATAGGCGA GTGTTAAGGT GTGTTGTATG |
||
M13 reverse primer | ||
赤文字: Multi cloning sites 下線: プライマーのアニーリング部位 |
ここでは、M13 系ベクター(pUC19 DNA など)のインサートチェックにGene RED PCR Mix Plusと2 × M13 Primer Mixを使用したコロニーPCR の使用例を紹介します。
必要本数分のGene RED PCR Mix を1.5 ml 容チューブに添加し、等量の2 × M13 Primer Mix を加え軽くピペッティングかタッピングで混合し、50 μl ずつPCR チューブに分注 。
Gene RED PCR Mix Plus(2×) |
25 µl |
2 x M13 Primer Mix |
25 µl |
Total |
50 µl |
爪楊枝またはチップでコロニーを軽く突き、反応液中で懸濁(コロニーは多量に持ち込まない)。
直ちにPCRを行う。
94°C |
3分 |
|
---|---|---|
94°C |
20秒 |
25サイクル
|
55°C |
20秒 |
|
72°C |
10秒/kbp (1 kbp以下の場合は10秒) |
PCR 後、各反応液の5 ~ 10 μl をそのままアガロースゲルにアプライし、電気泳動。
M13系ベクター |
増幅産物サイズ(no insert) |
pUC18/19 |
121 bp |
pBluescriptII |
247 bp |
pGEM-T easy |
250 bp |
pT7Blue |
172 bp |
pT7Blue2 |
388 bp |
λZAPII |
244 bp |
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