＜Complete RNA series ＞

Hpx mRNA, Rat　

～RNA の 5' 末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を付加した均質なラット mRNA 標品～

Code No.
製品名
包装単位
希望納入価格
311-06881 Hpx mRNA, Rat
10µl (10ng/µl)
32,000円

　本品は、ラット hemopexin 遺伝子の全長配列を有する RNA の 5'末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を付加した均質なラット mRNA 標品です。
本品を使用することで Real-Time PCR 実験の絶対量コントロールや、バリデーションコントロールを取るためのテンプレートとして用いることが可能です。

・5' 末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を持ちます。
・単一な遺伝子配列をもつ RNA です。
・世界初の生体内の mRNA を再現した単一の RNA 分子です。
・各種遺伝子発現解析の実験プロトコールの標準化をサポートします。

＊リアルタイム定量 RT-PCR のバリデーションコントロールに！
＊リアルタイム定量 RT-PCR の絶対量コントロールに！

Date1 : リアルタイム定量 PCR

本製品（ 108 copy ～ 103 copy 相当量 ) を 遺伝子特異的なプライマーとプローブを用いて 2step リアルタイム定量 PCR を行い、 Standard Curve を作成した 。

反応試薬： qPCR Mastermix Plus Low ROX
　　　　　　　(EUROGENTEC社製品， Code No. 312-80431 )
使用機器： ABI PRISM® 7500 Fast
反応条件： Detection： 蛍光標識プローブ
　　　　　　　Reaction Volume： 20µl
　　　　　　　standard 7500 mode
（プライマー，プローブ配列は下記に記載）
Cycle Program 95°C 10 min
95°C 15 sec ×40 Cycles
60°C 1 min
   

Standard Curve
Slope
Intercept
R2
-3.53029
42.07148

0.999641

⇒R2 ＞ 0.99 となり高い定量性を示した。

実験データ1で使用したプライマーおよびプローブ配列
 
配列
Forward Primer 5'- AAT CCC GTC ACC TCA GTG GAT -3'
Reverse Primer 5'- ACC CAG ACT TTG TCT TCC TTG ATC -3'
Double-Dye Probe 5'FAM- CTG CAT TCC GTG GTC CTG ACA GTG TC -3'TAMRA

＊プライマー，プローブは ニッポン イージーティー にて合成したものを使用しております。
本Primer-Probe配列は、Complete RNAの検量線作成の実験のみに用いるため設計しました。そのため、残存ゲノムDNAを検出しないような領域に設計する考慮はしておりませんので、ご注意ください。

 

純度： 変性アガロースゲル電気泳動

本製品を、変性アガロースゲルにて電気泳動を行い、純度を確認した。


M： RNA Ladder(0.125 - 6.0 k base) 1µl
1： 本製品 100 ng

2% Agarose S (ホルムアルデヒド変性ゲル）EtBr染色
100V 30min 電気泳動

本製品の配列は、Cap Site cDNA dT Rat Liver を鋳型とした PCR 産物に由来してお ります。
下記のリンクをクリックすると、塩基配列情報 (テキストファイル) をダウンロードで きます。

・ Hpx mRNA, Rat

[備考]　本製品の塩基配列は、〈GenBank〉Accession No,NM_053318(Version,NM_053318.1 ) の配列と以下の3箇所が異なります。

1 ・ 432塩基目の「u」は,NM_053318では「c」である。
2 ・ 5'側の6塩基および3'側の14塩基は製造上の理由で付加されている。
3 ・ 1491塩基目から約50merの「a」が付加されている。

【参考文献】
Hamaguchi, I., Imai, J., Momose, H., Kawamura, M., Mizukami, T., Kato, H., Naito, S., Maeyama, J., Masumi, A., Kuramitsu, M., Takizawa, K., Mochizuki, M., Ochiai, M., Yamamoto, A., Horiuchi, Y., Nomura, N., Watanabe, S., Yamaguchi, K.
Two vaccine toxicity-related genes Agp and Hpx could prove useful forpertussis vaccine safety control.
Vaccine 2007;25(17):3355-64.

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