<Complete RNA series

Beta actin mRNA, Human

RNA の 5' 末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を付加した均質なヒト mRNA 標品~

Code No.
製品名
包装単位
希望納入価格
317-06861 Beta actin mRNA, Human
 10µl (10ng/µl) 
32,000円

 本品は、ヒトベータアクチン遺伝子の全長配列を有する RNA の 5'末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を付加した均質なヒト mRNA 標品です。
Real-Time PCR 実験の絶対量コントロールや、バリデーションコントロールを取るためのテンプレートとして用いることが可能です。

・5' 末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を持ちます。
・単一な遺伝子配列をもつ RNA です。
・世界初の生体内の mRNA を再現した単一の RNA 分子です。
・各種遺伝子発現解析の実験プロトコールの標準化をサポートします。

*リアルタイム定量 RT-PCR のバリデーションコントロールに!
*リアルタイム定量 RT-PCR の絶対量コントロールに!

Date1 : リアルタイム定量 PCR

本製品( 108 copy ~ 103 copy 相当量 ) を 遺伝子特異的なプライマーとプローブを用いて 2step リアルタイム定量 PCR を行い、 Standard Curve を作成した 。

反応試薬: qPCR Mastermix Plus Low ROX
       (EUROGENTEC 社製品, 312-80431)
使用機器: ABI PRISM® 7500 Fast
反応条件: Detection : 蛍光標識プローブ
       Reaction Volume : 20 µl
       standard 7500 mode
(プライマー,プローブ配列は下記に記載)

Cycle Program 95°C 10 min
95°C 15 sec ×40 Cycles
60°C 1 min
   

Standard Curve

Slope
Intercept
R2
-3.4381
41.57203

0.998619

⇒ R2> 0.99 となり高い定量性を示した。

実験データ1で使用したプライマーおよびプローブ配列
 
配列
Forward Primer 5'-CCT GGC ACC CAG CAC AAT -3'
Reverse Primer 5'-GCC GAT CCA CAC GGA GTA CT -3'
Double-Dye Probe 5'FAM-ATC AAG ATC ATT GCT CCT CCT GAG CGC-3'TAMRA

*プライマー,プローブは ニッポン イージーティー にて合成したものを使用しております。
本Primer-Probe配列は、Complete RNAの検量線作成の実験のみに用いるため設計しました。そのため、残存ゲノムDNAを検出しないような領域に設計する考慮はしておりませんので、ご注意ください。

☆純度: 変性アガロースゲル電気泳動

本製品を、変性アガロースゲルにて電気泳動を行い、純度を確認した。


 1  2

M: RNA Ladder(0.125 - 6.0 k base) 1µl
1: 本製品 100 ng

2% Agarose S (ホルムアルデヒド変性ゲル)EtBr染色
100V 30min 電気泳動

本製品の配列は、Cap Site cDNA dT Human Liver Tumorを鋳型とした PCR 産物に由来してお ります。
下記のリンクをクリックすると、塩基配列情報 (テキストファイル) をダウンロードで きます。

・Beta actin mRNA, Human

[備考] 本製品の塩基配列は、〈GenBank〉Accession NM_001101 (Version, NM_001101.2) の配列と以下の5箇所が異なります。

1・ 7塩基目から17塩基目の「accgccgagac」は,NM_00110では存在しない。
2・ 1485塩基目の「a」は,NM_001101では「g」である。
3・ 1693塩基目に「u」が1塩基挿入されている
4・ 5'側の6塩基および3'側の14塩基は製造上の理由で付加されています。
5・ 1811塩基目から約50merの「a」が付加されています。

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