～RNA の 5' 末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を付加した均質なヒト mRNA 標品～
Code No. |
製品名 |
包装単位 |
希望納入価格 |
| 314-06631 | Albumin mRNA, Human | 10µl (10ng/µl) |
32,000円 |
本品は、ヒトアルブミン遺伝子の全長配列を有する in vitro 転写産物で、RNA の 5'末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を付加した均質なヒト mRNA 標品です。Real-Time PCR 実験の絶対量コントロールや、バリデーションコントロールを取るためのテンプレートとして用いることが可能です。
・5' 末端に cap 構造を、3' 末端に Poly (A) tail を持ちます。
・単一な遺伝子配列をもつ RNA です。
・世界初の生体内の mRNA を再現した単一の RNA 分子です。
・各種遺伝子発現解析の実験プロトコールの標準化をサポートします。
＊リアルタイム定量 RT-PCR のバリデーションコントロールに！
＊リアルタイム定量 RT-PCR の絶対量コントロールに！
本製品（10fg, 100fg, 1pg, 10pg) を ヒトアルブミン遺伝子特異的なプライマーとプローブを用いて 2step リアルタイム定量 PCR を行なった。
反応試薬： qPCR Mastermix Plus
(EUROGENTEC社製品， Code No.312-80291)
使用機器： ABI PRISM® 7700
反応条件： Detection： 蛍光標識プローブ
Reaction Volume： 25 µl
（プライマー，プローブ配列は下記に記載）
Cycle Program 50°C 2 min 95°C 10 min 95°C 15 sec ×40 Cycles 60°C 1 min Rn vs Cycles
Standard Curve
10fg から 10pg の範囲において、高い定量性を示した。
すべてのウェルにおいて本製品 1pg を ヒトアルブミン遺伝子特異的なプライマーとプローブを用いて 2step リアルタイム定量 PCR を行なった。
反応試薬： qPCR Mastermix Plus (EUROGENTEC社製品， Code No.312-80291)
（プライマー，プローブ配列は下記に記載）
Rn vs Cycles
平均 Ct 値 = 23.81
標準偏差 = 0.099
相対標準偏差 = 0.418 %
Forward Primer 5'- GCT CGA TGA ACT TCG GGA TG -3' Reverse Primer 5'- TTT GGA GAC TGG CAC ACT TGA G -3' Double-Dye Probe 5'FAM- AGG GAA GGC TTC GTC TGC CAA ACA GAG -3'TAMRA ＊プライマー，プローブは ニッポン イージーティー にて合成したものを使用しております。
本Primer-Probe配列は、Complete RNAの検量線作成の実験のみに用いるため設計しました。そのため、残存ゲノムDNAを検出しないような領域に設計する考慮はしておりませんので、ご注意ください。
本製品を、変性アガロースゲルにて電気泳動を行い、純度を確認した。
M： RNA Ladder(0.125 - 6.0 k base) 1µl
1： 本製品 50 ng
2： 本製品 100 ng
2% Agarose S (ホルムアルデヒド変性ゲル）EtBr染色
100V 30min 電気泳動
本製品の配列は、Cap Site cDNA dT Human Liver を鋳型とした PCR 産物に由来してお ります。
下記のリンクをクリックすると、塩基配列情報 (テキストファイル) をダウンロードで きます。・Albumin mRNA, Human
[備考] 本製品の塩基配列は、〈GenBank〉Accession No,NM_000477 (Version, NM_000477.3) の配列と以下の8箇所が異なります。
1 ・ 230 塩基目の 「g」 は、NM_000477 では 「a」 である。
2 ・ 1,567 塩基目の 「g」 は、NM_000477 では 「a」 である。
3 ・ 1,713 塩基目の 「u」 は、 NM_000477 では 「c」である。
4 ・ 1,879 塩基目の 「c」 の後ろに、NM_000477 では 「t」 が存在する。
5 ・ 1,955 塩基目の 「u」 は、 NM_000477 では存在しない。
6 ・ 2,061塩基で終わっているが、NM_000477 では 2,215 塩基目まで配列が続 く。
7 ・ 5'側の6塩基および 3'側の14塩基は製造上の理由で付加されている。
8 ・ 2,062塩基目から約50merの「a」が付加されている。
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