CapSite® Huntingの例


Control Primer(添付)を用いたCapSite® Hunting

 以下は、本品に添付しているControl Primer1, 2を用いて、以下のCap Site cDNA® dTを鋳型としてコントロール遺伝子のCapSite® Huntingを行った結果である。コントロール遺伝子及びプライマーの位置関係は下記の通りである。PCR条件はマニュアルの反応例に従った。lane 3はControl Primer2及びrOligo相補的配列部分に特異的である2RDT Primerを用いたnested PCRである。lane 2はコントロ−ル遺伝子特異的プライマ−のアンチセンス鎖としてControl Primer2、センス鎖としてコントロ−ル遺伝子の翻訳開始点付近に設計したControl Primer-Senseを用いたPCRである。lane2 はlane 3のポジティブコントロ−ルに相当する。

Cap Site cDNA® dT コントロール遺伝子
Human β-アクチン
Mouse
Rat
Chicken
Drosophila melanogaster Ribosomal Protein49
Arabidopsis thaliana Columbia Elongation Factor-1αA3(EF-1αA3)
Oryza sativa Nihonbare(Ear) Elongation Factor-1α(EF-1α)

1RDT+Control 1が外側で2RDT+Control 2が内側。遺伝子の既知領域内にはControlとPCRをかけられるControl-Senseも設定されている
図2 プライマーの位置関係

泳動結果1 : Human Brainでは380と280、Mouse Testisでは510と410、Rat Liverでは460と360bpにバンドが出ている
泳動結果2 : Chicken Brainでは320と190、Drosophila Adultでは360と290、Oriza sativaでは330と200、Arabidopsisでは330と200bpにバンドが出ている

PCR産物の1/5量(5µl)を電気泳動
3% Agarose 21


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