ISOPLANT IIデ−タ集

[植物の葉より抽出されたDNAを用いたRAPD解析]

　それぞれ凍結粉砕した葉0.1gを用いて抽出したDNAの1/100量を使用して、RAPD解析を行った。

RAPD-PCR
PCR Mixture
Template DNA
1 µl
10×Gene Taq Universal Buffer
5 µl
dNTP Mixture (2.5 mM each)
4 µl
Arbitrary Primer(AP-A-2 primer) (10µM)
1 µl
Gene Taq (5 units/µl)
0.25 µl
H2O
38.75 µl
Total Volume
50 µl

Arbitrary Primer : AP-A-2 (TGGATTGGTC)
mRNA Fingerprinting Kit(Code No. 316-03151)に含まれているArbitrary Primer Set Aを使用した。

PCR条件
95°C 1 cycle
95°C
95°C
↓
95°C 15 sec. 25 cycles
40°C 2 min.
72°C 1 min.
↓
72°C 5 min.

結果

ISP2RAPD-PCR
  • M:Marker 4 (φX174/Hae III)
  • lane 1. スイカ
  • lane 2. キュウリ
  • lane 3. カボチャ
  • lane 4. トウモロコシ
  • lane 5. イネ
  • lane 6. ネギ
  • lane 7. マメ
  • lane 8. タバコ
  • lane 9. ホウレンソウ
  • lane 10. イチョウ
  • lane 11. リンゴ
  • lane 12. カキ
  • lane 13. モモ
  • lane 14. ユズ
  • lane 15. プル−ン
  • lane 16. ナシ
3% Agarose 21

[植物の葉より抽出されたDNAの制限酵素反応]

それぞれ凍結粉砕した葉0.1gを用いて抽出したDNAの1/20量を使用して、制限酵素反応 (5〜20units) を行った。

Restriction Enz cut-plant
  • lane 1. タバコ
  • lane 2. ホウレンソウ
  • lane 3. ニンジン
  • lane 4. ナス
  • lane 5. イネ
  • lane 6. 茶
  • lane 7. ユズ
  • lane 8. リンゴ

M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I)
a : intact DNA
b : Hind III digest+RNase A
0.8% Agarose S

(注意)上記の2つのデ−タは、DNAを抽出する際にNaBH4処理を行っている。

[細菌、酵母より抽出されたDNAの制限酵素反応]

それぞれ1.5ml液体培養したものから抽出したDNAの1/20量を使用して、制限酵素反応 (5〜20units) を行った。

Restriction Enz cut-bac
  • lane 1. Serratia marcescens
  • lane 2. Moraxella bovis
  • lane 3. Haemophilus influenzae c
  • lane 4. Proteus vulgaris
  • lane 5. Shizosaccharomyces pombe
  • lane 6. Pichia pastoris
  • lane 7. Saccaromyces cerevisiae

M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I)
a:intact DNA
b:Hind III digest+RNase A
0.8% Agarose S

[ISOPLANT IIと従来品(ISOPLANT)の純度比較]

　ホウレンソウ及びリンゴの葉よりISOPLANT IIと従来品(ISOPLANT)で同量の試料からDNAを抽出し、吸光度(200〜300 nm)を測定した。
　ISOPLANT IIで抽出されたDNAは、260 nmにピ−クを持つきれいな山形を示し、多糖類、ポリフェノ−ル類等の夾雑物が除かれた純度の高いDNAであることが示された。

ホウレンソウの場合 リンゴの場合
Purity Chart1 Purity Chart2

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