多糖類やポリフェノ−ル類を効果的に除去する植物、酵母、細菌からのDNA抽出キット
| Code No. | 製品名 | 包装単位 | 希望納入価格 |
|---|---|---|---|
| 310-04151 | ISOPLANT II | 100回分 |
29,000円 |
| 316-04153 | 20回分 |
9,000円 |
ISOPLANT II(アイソプラントII)は、植物、酵母、細菌から短時間にDNAを抽出するためのキットである。
植物の組織は動物の組織に比べて、多糖類やポリフェノ−ル類を多く含んでおり、DNAを抽出する際に混入することがある。これらの物質は、制限酵素反応やPCRを阻害し、DNAの定量を困難にする。
ISOPLANT IIは、従来品のISOPLANTと同様にSolution IIの主成分である塩化ベンジルによって、細胞壁、細胞膜及び核膜等を破壊し、界面活性剤の存在下で可溶化する。さらにISOPLANT IIでは、多糖類やポリフェノ−ル類といった阻害物質を効果的に除去できるよう試薬とプロトコ−ルを改良してある。また、草本植物からの抽出はもちろん、これまで難しかった木本植物からもDNAを抽出することが可能で、得られたDNAはPCRや制限酵素反応に使用することができる。
≪100回分≫
Wash Buffer Solution I*1) Solution II*2) Solution III-A Solution III-B TE (pH8.0) RNase A (1mg/ml) マニュアル *1) Solution I中に白い沈殿が現れることがありますが、品質に問題はありません。このような場合には、50°C程度の湯浴にて結晶を完全に溶解させてから使用して下さい。
また、Solution Iにはタンパク質変性剤等が含まれているので、取り扱いに注意して下さい。目に入ったり、皮膚に付着した場合には、ただちに多量の水で十分に洗い流して下さい。なお、異常が認められた場合には、直ちに医師の診察を受けて下さい。*2) Solution IIの主成分は塩化ベンジルです。塩化ベンジルは、消防法により危険物に指定されています。お取り扱いの際には、製品添付マニュアルのp.3、IV 使用上の注意 をご確認下さい。 注) 植物サンプルからDNAを抽出する際には、2-Mercaptoethanol(2-メルカプトエタノ−ル：消防法により危険物に指定されています)及び場合によっては、NaBH4(テトラヒドロほう酸ナトリウム：消防法により危険物に指定されています)が別途必要です。
冷蔵保存（4゜Ｃ）
- Wash BufferとRNaseA以外は、室温での保存も可能。
- また、長期間使用しない場合は、RNaseAを冷凍保存（－20゜Ｃ）する。
製品マニュアルをご覧になる際にはAdobe Acrobat® ReaderまたはAdobe Acrobat® Reader Plug-inが必要です。
目や皮膚に付着した場合には、以下の処置を行って下さい。
目に入った場合：ただちに多量の水で15分以上洗い流す。
皮膚についた場合：多量の水で石けんを用いて洗う。
吸入した場合：新鮮な空気の場所にて安静保温に努める。
誤飲した場合：口をすすぎ、水に活性炭を懸濁した液を飲ませて、医師の診察を受ける。胃等の粘膜が侵されているので、無理に吐かせてはいけない。
なお、異常が認められた場合には、ただちに医師の診察を受ける。
本品の取り扱いは、マニュアルの記載内容通りに行って下さい。マニュアル記載内容と異なったお取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。
1)Xing S. and Aharon G.: Analytical Biochemistry, 174, 650-657 (1988)
2)C. S. Kim, C. H. Lee, J. S. Shin, Y. S. Chung and N. I. Hyung: Nucleic Acids Res., 25 (5) 1085-1086 (1997)
トラブル 対策 Solution Iに白い結晶が現れる。 50°C程度の湯浴中で、結晶を完全に溶解した後、内容物が均一になるよう撹拌してから使用する。 Wash Buffer+2-ME添加後の遠心で、植物試料が浮遊していて上清が取りにくい。 植物種によって遠心しても試料が沈殿しない場合があるが、チップの先を溶液に入れ、吸い出す。この際、植物片が溶液と共に吸い出されることがあるが、多少はやむを得ない。 Solution III-A, Bを加えた後の遠心後の上清が濁っている、または着色している。 上清を別のチュ−ブへ移した後、再度Solution III-A 100µl, Solution III-B 120µlを加えて混合し、遠心(14k×g, 4°C, 10分間)を行い、上清を使用する。(†) エタノ−ル沈殿後の遠心で、DNAが茶色く着色している。 沈殿物に茶色い着色が認められる場合には、再度抽出を行う。その際、抽出操作において以下のことを試してみる。
- NaBH4処理を行う。(製品添付マニュアルp.4参照)
- Wash Buffer, Solution Iに2-Mercaptoethanol(製品添付マニュアルp.4参照)を加えていない場合は加える。
- Wash Buffer+2-MEを植物試料に加えた後、50°Cで10分間インキュベ−トする。
- 上記(†)を行う。
DNAと異なる白い沈殿が生じた。
- TEに溶解しない物質である場合は、遠心して上清を使用する。(‡)
- 抽出操作において上記(†)を試してみる。
DNA沈殿が溶解しない。 4°Cにて一晩または、50°Cにて1時間放置する。ピペッティングしても良いが、得られたDNAが切断されることがある。 収量が少ない。
- できるだけ新鮮な試料を使用する。
- 凍結粉砕した試料を使用する。凍結粉砕できない場合には、できるだけ試料を細かく刻む。
- スケ−ルアップする。
- Solution II処理時間を長くする。ただし、この場合は、夾雑物の混入も多くなる可能性が高くなることに注意する。
得られたDNA溶液に多量のRNAが混入している。 得られたDNA溶液に添付のRNase Aを終濃度10〜20 µg/mlになるように加えて、37°Cにて30分間反応させる。必要があれば反応終了後フェノ−ル/クロロホルム処理を行う。 得られたDNAを鋳型としてPCRを行ったが、増幅が見られない。
- DNA溶液が着色している場合には上記(†)を、DNAと異なる白い沈殿が得られた場合は、上記(‡)を試してみる。
- PCRに用いる鋳型の量を減らすことで(1/10希釈等)PCRの阻害を減らすことができる。
得られたDNAが切断されている。 抽出操作中、DNAの物理的切断を防ぐため、ピペットチップの先端をカットして使用する。
製品名 Code No. 包装単位 希望納入価格 314-02731 310-02733 318-02871 314-02873 312-02874 318-03231 314-03233 312-03234 315-03241 313-03242 311-03243 316-90025
