ISOPLANT使用例 (植物からのDNA抽出)


1. 抽出DNAの収量と純度

ISOPLANT CTAB法*
yeild (µg/g) A260/280 yeild (µg/g) AA260/280
Arabidopsis thaliana
100-120
1.8
15-30
1.8
Spinach
80-120
1.8
30-50
1.8
tobacco
4-20
1.8
60-80
1.7
tulip
10-20
1.8
10-20
1.8
rice
10-20
1.8
10-20
1.7

*CTAB法=cetyltrimethylammonium bromide

2. 抽出DNAの制限酵素反応

抽出DNAは、2〜20倍量の制限酵素(EcoR I及びHind III)で切断できることを確認した。

example2photo lane 1. spinach
lane 2. Arabidopsis thaliana
lane 3. tobacco
lane 4. rice
a : intact
b : Eco R I digest
c : Hind III digest
M: Marker 6 (λ/Sty I)

3. 抽出DNAのPCR

抽出DNAを鋳型として、tobacco ribulose-1,5-diphosphate carboxylase large subunit gene を増幅するプライマーを用いたPCRにて、特異的なバンドを増幅できることを確認した。

example3photo lane 1. spinach
lane 2. Arabidopsis thaliana
lane 3. tobacco
lane 4. tulip
lane 5. rice
M : Marker 6 (λ/Sty I digest)

細菌からのDNAの抽出
酵母からのDNAの抽出
放線菌、カビからのDNAの抽出


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