ISOGEN, ISOGEN-LS使用例

1. 収量の目安

＜RNA＞		試料 収量 tissue mouse liver spleen kidney skeletal brain placenta 　　6〜10µg RNA/mg tissue 　　6〜10µg RNA/mg tissue 　　3〜4µg RNA/mg tissue 　　1〜1.5µg RNA/mg tissue 　　1〜1.5µg RNA/mg tissue 　　1〜4µg RNA/mg tissue ラットまたは下垂体または ヒト肝針生検材料 　　4〜8µg RNA/mg tissue plant ArabidopsisまたはTobacco 　　150〜200µg RNA/0.5〜1g weight tissue culture cells epithelial fibroblasts 　　8〜15µg RNA/106 cell 　　5〜7µg RNA/106 cell blood (ヒトまたは動物) 　　7〜15µg RNA/ml blood
＜DNA＞		試料 収量 tissue liver kidney skeletal brain placenta 3〜4µg DNA/mg tissue 3〜4µg DNA/mg tissue 2〜3µg DNA/mg tissue 2〜3µg DNA/mg tissue 2〜3µg DNA/mg tissue culture cells (human, rat, mouse) 5〜7µg DNA/106 cells

 

2. ISOGEN法とチオシアン酸グアニジン-塩化セシウム(GT-CsCl)超遠心法の比較

ISOGEN法 GT-CsCl超遠心法 総RNAa β-actin mRNAb 総RNAa β-actin mRNAb ヒト乳房上皮細胞 7.0±0.4 4.1±0.3 5.6±0.6 3.1±0.2 ラット乳房 4.7±0.2 6.7±0.6 3.4±0.4 5.0±0.4 マウス肝 7.4±0.4 5.7±0.3 4.8±0.4 3.9±0.4

a.　µg/mg組織あるいは106細胞 b.　β-actin cDNAを用いたノーザン分析におけるデンシトメータ単位/mg組織あるいは106細胞

 

3. ISOGEN使用例

＜ISOGEN法で単離した総RNAの電気泳動＞
	lane1-3　ラット胸腺RNA(3µg/lane) lane4-6　ヒト乳房上皮細胞RNA(5µg/lane) ホルムアルデヒド-(1%)アガロース電気泳動 臭化エチジウム染色 lane1　ラット胸腺RNA(3µg/lane) lane2　ラット胸腺RNA(3µg/lane) lane3　ラット胸腺RNA(3µg/lane) RNase処理(5µg/ml, 30min., 37°C) lane4　ラット胸腺RNA(3µg/lane) DNase処理(50units, 30min., 37°C) ホルムアルデヒド-(1%)アガロース電気泳動 臭化エチジウム染色 lane1　ラット胸腺RNA(3µg/lane) lane2　ラット胸腺RNA(3µg/lane) lane3　ラット胸腺RNA(3µg/lane) RNase処理(5µg/ml, 30min., 37°C) lane4　ラット胸腺RNA(3µg/lane) DNase処理(50units, 30min., 37°C) lane5　BPB ホルムアルデヒド-(1%)アガロース電気泳動後ナイロンメンブレンにブロッティング メチレンブルー染色
＜ISOGEN法で単離したRNA、DNA及びタンパク質のNorthern、Southern、Westernブロッティング＞
	A : 成長ホルモン(GH)cDNAを用いて、総RNA(5µg/lane)中のGHmRNA(1kb)をNorthern分析した。 B : GHcDNAを用いて、EcoRⅠで消化した総DNA(5µg/lane)中のGH遺伝子断片(11.4kb)をSouthern分析した。 C : 抗GH抗体を用いて、総タンパク質(50µg/lane)中のGH(22kDa)をWestern分析した。
＜ISOGEN法で抽出した総RNAを用いたmRNAフィンガープリンティング＞
	ここをクリックして下さい。[mRNA Fingerprinting Kit Ver.1.0SG 使用例]

 

4. ISOGEN-LS使用例

＜ISOGEN法で単離したhepatitis C viral (HCV) RNAを用いたRT-PCR＞
	A : ヒト血清から単離されたHCV RNAを用いてnested PCR法により得られたHCVに特異的なPCR産物。 臭化エチジウムにより染色されたゲル上に256bpのHCVに特異的なPCR産物が認められる。	lane 1　RNAなし lane 2　RCR産物(GR93-74) lane 3　HCVネガティブコントロール lane 4　RCR産物(GR93-72) lane 5　HCVポジティブコントロール 左 : ヒト血清0.15mlから抽出されたRNA 右 : ヒト血清0.3mlから抽出されたRNA
	B : ヒト血清及び肝臓から単離されたHCV RNAを用いてRT-PCR法により得られたHCVに特異的なPCR産物。 臭化エチジウムにより染色されたゲル上に272bpのHCVに特異的なPCR産物が認められる。	lane 1　RNAなし lane 2　HCVネガティブコントロール(ヒト血清) lane 3　HCVポジティブコントロール(ヒト血清) lane 4　RCR産物(GR93-84)(ヒト血清) lane 5　RCR産物(GR93-82)(ヒト肝臓バイオプシー) lane 6　RCR産物(GR93-76)(ヒト血清) lane 7　HCVネガティブコントロール(ヒト血清)

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