以下の操作は、安全のために手袋を着用して行う。なお、塩酸グアニジン、SDS、エタノール及びイソプロパノールは別に準備しなければならない。[プロトコール3]は、前述の[プロトコール1-1]でISOGEN 1mlまたはISOGEN-LS 0.75mlを用いた場合に対応する。
supernatant[protocol 2]*1)
↓ add 1.5ml of isopropanol
↓ store for 10min. at room temperature
↓ 12K×g for 10min. at 4°C
precipitate
↓ add 2ml of 0.3M guanidine hydrochloride in 95% ethanol*2)
↓ store for 20min. at room temperature
↓ 7.5K×g for 5min. at 4°C
precipitate
↓ add 2ml of 0.3M guanidine hydrochloride in 95% ethanol*2)
↓ store for 20min. at room temperature
↓ 7.5K×g for 5min. at 4°C
precipitate
↓ add 2ml of 0.3M guanidine hydrochloride in 95% ethanol*2)
↓ store for 20min. at room temperature
↓ 7.5K×g for 5min. at 4°C
precipitate
↓ add 2ml of 0.3M guanidine hydrochloride in 95% ethanol*2)
↓ store for 20min. at room temperature
↓ 7.5K×g for 5min. at 4°C
precipitate
↓ add 2ml of ethanol
↓ store for 20min. at room temperature
↓ 7.5K×g for 5min. at 4°C
precipitate
↓ dry briefly*3)
↓ add 1% SDS
↓ dissolve*4)
protein solution*5)
*1)プロトコールに従えば上清の量は約0.8mlである。0.1%SDSにて4°Cで透析すると、収量が上がることがある。
*2)この状態で4°Cで少なくとも1か月あるいは、-20°Cで少なくとも1年間保存できる。
*3)5-10分間真空乾燥させる。
*4)完全に溶解するためには50°Cで保温しなければならない。
*5)不溶物は遠心分離(10K×g, 10min., 4°C)により除去する。得られたタンパク質はそのままウエスタンブロッティングに使用できる。また、-20°Cで保存できる。
[Code No./容量] [特長] [保存条件] [使用上の注意] [参考文献] [製品添付マニュアル] [ISOGEN法の原理] [プロトコール, トラブルシューティング] [使用例]