T4 DNA Ligase

製品概要

　T4 DNA Ligaseは、隣接した5'-P末端と3'-OH末端のホスホジエステル結合による、二本鎖DNAどうしの連結反応を触媒する酵素である。

製品仕様

起源：Escherichia coli lysogen for λ T4-lig phage
活性：300〜3000units/µl
単位の定義：1unitは反応混合液20µl中6µlのλ/Hind IIIフラグメントを16°C、60分間で95%以上結合させる酵素活性とする。 形状：50mmol/l KCl, 10mmol/l Tris-HCl(pH7.5), 0.1mmol/l EDTA, 10mmol/l 2-Mercaptethanol, 50% Glycerol
酵素反応条件：50mmol/l Tris-HCl(pH7.9), 10mmol/l MgCl2, 20mmol/l DTT, 1mmol/l ATP, 16°C
添付の酵素反応専用バッファー(1ml×1本)は酵素反応条件の10倍濃度である。例えば反応容量が50µlの場合には酵素反応専用バッファーを5µl加える。
純度：本酵素1000unitsと1µgのプラスミドpBR322を、16°Cあるいは37°Cで16時間反応させた後、アガロースゲル電気泳動を行った結果、oc-DNAの増加などの変化は認められない。
本酵素1000unitsと1µgのλ/Hind IIIフラグメントをライゲーションが起こらない条件下で16時間反応させた後、アガロースゲル電気泳動を行った結果、DNAフラグメントのパターンに変化は認められなかった。

(1)粘着末端のライゲーション

(2)平滑末端のライゲーション

文献

1) Weiss, B., Jacquemin-Sablon, A., Live, T. R., Fareed, G. C. and Richardson, C. C. : J. Biol. Chem., 243, 4543(1968)
2) Murray, N. E., Bruce, S. A. and Murray, K. : J. Mol. Biol., 132, 493(1979)

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