T4 gene 32 protein

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
312-03251	T4 gene 32 protein	100 µg	14,000円
318-03253		20 µg	5,600円

　T4 gene 32 proteinはバクテリオファージT4のDNAに必須な核酸結合タンパク質で、ヘリックス構造を不安定化する働きがあります。DNAポリメラーゼによるDNA合成の促進、site-specific mutagenesis、シークエンスの際のエキストラバンド消失、あるいは電子顕微鏡による一本鎖DNAのマーキング等に使用され、最近では特にPCRにおける阻害物質による影響を緩和させる働きに注目されています。

[起源]

Escherichia coli BB infected with T4(33- 55- 61-)phage

[濃度]

3〜8mg/ml

[形状]

20 mmol/l Tris-HCl(pH8.1), 100 mmol/l NaCl, 1mmol/l EDTA, 1 mmol/l 2-Mercaptoethanol, 50% Glycerol

[保存条件]

-20°C

[純度]

• SDS-PAGEにおいて95%以上単一バンドを示す。
• 1µgのλDNAと50µgのT4 gene 32 proteinを37度で1時間反応させても、λDNAの電気泳動パターンに変化は認められない。

[使用例]

<T4 gene 32 proteinを用いたヘミンによるPCR阻害の緩和>

0.1ngの鋳型DNA(pBR322)と一連の濃度のヘミンを含む反応溶液にて、T4 gene 32 proteinの存在下あるいは非存在下でPCRを行った。

template(pBR322)	0.1ng
hemin	10〜0.001µg/µl
10×Gene Taq Universal Buffer	5µl
dNTP Mixture(2.5mmol/l each)	4µl
primer-forward(20pmol)	1µl
primer-reverse(20pmol)	1µl
Gene Taq(5units/µl)	0.5µl
T4 gene 32 protein	0または2µg(最終濃度40ng/µl)
ddH2O
Total	50µl

↓

↓
10µl 電気泳動
2% Agarose S, 100V, 30min., EtBr染色

1µg/µlの濃度のヘミンの存在下ではPCRが阻害されているが、40ng/µlのT4 gene 32 protein(gp32)を加えると、1µg/µlのヘミン存在下で阻害が緩和されている。

Lane 1, 12　Marker5(φX174/Hinc II digest) Lane 2　gp32 -　hemin 10µg/µl Lane 3　gp32 -　hemin 1µg/µl Lane 4　gp32 -　hemin 0.1µg/µl Lane 5　gp32 -　hemin 0.01µg/µl Lane 6　gp32 -　hemin 0.001µg/µl Lane 7　gp32 +　hemin 10µg/µl Lane 8　gp32 +　hemin 1µg/µl Lane 9　gp32 +　hemin 0.1µg/µl Lane 10　gp32 +　hemin 0.01µg/µl Lane 11　gp32 +　hemin 0.001µg/µl

＜T4 gene 32 proteinを用いたメラニンによるPCR阻害の緩和＞

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[参考文献]

1) Kreader, C. A.: Appl. Environ.Microbiol.,62(3),1102(1996)
2) Bittner, M.,. Burke, R. L. and Alberts, B.M.: J. Biol. Chem., 254(19), 9565(1979)
3) Schwarz, K., Hansen-Hagge, T. and Bartram, C.: Nucleic Acids Res., 18(4), 1079(1990)
4) Panaccio, M.and Lew, A.: Nucleic Acids Res., 17(9), 3616(1989)
5) Huang, H. and Keohavong, P.: DNA AND CELL BIOLOGY, 15(7),589(1996)

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